抗CD14单克隆抗体对脓毒症大鼠肺组织KC和ICAM-1表达的影响

摘要

目的:
　　探讨抗CD14单克隆抗体（Anti-CD14 monoclonal antibody，Anti-CD14McAb）治疗大鼠脓毒症急性肺损伤的保护机制。
　　方法:
　　在体部分：18只雄性Wistar大鼠（200g-250g）随机均分为3组，脓毒症组（CLP组）、假手术组（Sham组）、抗CD14治疗组（Anti-CD14组）。CLP组和Anti-CD14组，采用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症急性肺损伤模型，Sham组作为对照组，开腹后只翻动盲肠，不进行结扎穿孔。Anti-CD14组术后经股静脉注射Anti-CD14McAb0.2ml（1ug/ml），Sham组、CLP组术后经股静脉注射等量生理盐水0.2ml，6小时后经腹主动脉抽血，测定3组大鼠血浆中KC、sICAM-1表达水平，右肺下叶HE染色，观察肺组织病理结构的改变。离体部分：将培养的NR8383一部分接种于24孔培养板，分为3组，对照组（Ⅰ组）、脓毒症模型组（Ⅱ组）和Anti-CD14干预组（Ⅲ组）。Ⅰ组加入正常血浆，Ⅱ组加入脓毒症血浆，Ⅲ组加入脓毒症血浆和抗CD14单克隆抗体共同干预，37℃、5％CO2培养箱孵育1小时，刮取NR8383，采用Western blot测定NR8383内NF-κB（p65）蛋白的表达水平；另一部分接种在预先放入适当大小灭菌消毒的盖玻片的24孔板上，分组及干预措施同上，采用激光扫描共聚焦显微镜（CLSM）检测NR8383内NF-κB（p65）蛋白入核情况。
　　结果:
　　在体实验提示：与Sham组[KC（pg/ml）：72.645±19.860，sICAM-1（pg/ml）：252.766±19.921]相比，CLP组血浆KC、sICAM-1水平[KC（pg/ml）：490.316±43.403，sICAM-1（pg/ml）：686.952±36.411]和Anti-CD14组血浆KC、sICAM-1水平[KC（pg/ml）：348.150±20.924，sICAM-1（pg/ml）：411.050±47.170]明显升高，而Anti-CD14组KC、sICAM-1水平明显低于CLP组，认为有统计学差异（P<0.05）；肺组织病理结果提示CLP组肺间质明显增厚、肺间质及肺泡腔内有大量炎症细胞浸润，Anti-CD14组症状较CLP组明显减轻，但较Sham组有所增加；细胞实验Western blot检测显示：Ⅱ组（2.1903±0.1199）和Ⅲ组（1.3658±0.1018）NR8383的NF-κB（p65）入核量高于Ⅰ组（1.0122±0.0780），Ⅲ组的NF-κB（p65）入核量低于Ⅱ组，差别有统计学意义（P<0.05）。细胞实验CLSM检测结果提示：与Ⅰ组（0.131±0.009）相比，Ⅱ组（0.685±0.037）和Ⅲ组（0.210±0.008）NR8383NF-κB p65蛋白入核明显升高，而Ⅲ组NR8383NF-κB p65蛋白入核低于Ⅱ组（0.685±0.037），差别有统计学意义（P<0.05）。
　　结论:
　　Anti-CD14McAb在脓毒症急性肺损伤时可能调控肺泡巨噬细胞NF-κB（p65）蛋白入核，使其趋化因子KC表达减少，进而减少中性粒细胞浸润，起到肺保护作用；同时Anti-CD14McAb能抑制内皮细胞表达sICAM-1，减少中性粒细胞对内皮细胞的粘附作用，起到肺保护作用。

目录

声明

常用缩略词中英文对照表

前言

1.材料与方法

1.1实验材料

1.1.1实验动物

1.1.2主要试剂

1.1.3主要仪器

1.1.4主要试剂配方

1.2实验方法

1.2.1动物模型制备

1.2.2标本制备

1.2.3细胞模型制备

1.3形态学观察及相关指标检测

1.3.1形态学观察

1.3.2血浆KC、sICAM-1含量测定

1.3.3 NR8383 NF-κB（P65）蛋白Western blot测定

1.3.4 NR8383NF-κB（P65）蛋白入核 CLSM法测定

1.4统计学方法

2.结 果

2.1血浆KC、sICAM-1检测

2.2 各组NR8383NF-κB（p65）蛋白入核Western blot检测

2.3各组NR8383NF-κB（p65）蛋白入核CLSM

2.4脓毒症大鼠肺组织的病理结果

3.讨 论

4.结 论

参考文献

综述:脂多糖致脓毒症急性肺损伤的研究进展

致谢

个 人 简 历