金属铂(Ⅱ)配合物与g-四链体DNAs的相互作用及生物活性研究

摘要

金属配合物键合和稳定G-四链体DNA的性质，在癌症治疗中有重要意义，因为它可以通过这种方式来调控原癌基因的转录水平、抑制端粒酶活性和癌细胞的增殖。本论文合成了三个新型的基于邻菲罗啉苯并咪唑衍生物的金属铂(Ⅱ)配合物，并详细研究了它们与G-四链体DNAs(人端粒HTG、原癌基因启动子c-Myc和c-Kit2)的相互作用、端粒酶活性抑制以及抗肿瘤作用。
　　1.通过FRET melting实验和PCR Stop实验表明，三个配合物能够稳定G-四链体DNA的结构。在含100 mM KCl的磷酸缓冲体系中，当配合物A、B和C浓度为1μM时，人端粒F21T的熔点温度增加值（△Tm）分别为25.4℃、27.1℃和29.2℃，启动子Fc-MycT的△Tm值分别为14.8℃、15.5℃和16.6℃，尽管启动子Fc-Kit2T的△Tm值分别为7.6℃、10.7℃和12.5℃。通过体外端粒酶活性检测实验得出，三个配合物可以通过稳定端粒末端G-四链体DNA的结构，间接抑制端粒酶的活性。
　　2.竞争的FRET melting实验表明，含100mM KCl的磷酸缓冲体系中，在10倍过量双螺旋DNA存在下，G-四链体DNA的△Tm值几乎不变，然而在25倍过量双螺旋DNA存在下，△Tm值均有不同程度的减小，说明在10倍过量双螺旋DNA存在下，三个配合物能选择性识别并稳定G-四链体DNA结构。
　　3.紫外吸收滴定实验和荧光滴定实验表明，配合物A、B和C可能堆积在G-四链体DNA的末端，与G-四聚体平面发生了π-π相互作用，结合常数约为106-107M-1。CD谱实验表明，配合物与G-四链体DNA作用后，CD谱上相应的特征峰变化较小，说明作用后对其二级结构只是稍有扰动。
　　4.通过MTT比色法证实了配合物A、B和C都能够一定程度上抑制HeLa细胞和HepG2细胞的增殖，其中配合物A的效果最强，相应的IC50值分别为15μM和42μM。通过细胞周期分析实验得出，配合物与HeLa细胞和HepG2细胞作用24h后，G0/G1的细胞比例增加，说明配合物A、B和C可能是通过将细胞阻滞在G0/G1期影响细胞的增殖。

目录

摘要

第一章 综述

1．1 引言

1．2 金属铂抗癌药物的研究历程

1．3 金属铂抗癌药物设计的新策略

1．4 以G-四链体DNA为靶点的抗癌药物设计

1．4．1 G-四链体DNA

1．4．2 能识别G-四链体DNA化学小分子的研究进展

1．5 以端粒酶为靶点的抗癌药物的设计

1．5．1 引言

1．5．2 端粒、端粒酶与肿瘤的关系

1．6 本论文的设计思路和研究内容

1．6．1 设计思路

1．6．2 研究内容

第二章 金属铂(Ⅱ)配合物的合成和表征

2．1 引言

2．2 实验材料

2．2．1 实验试剂

2．2．2 实验设备

2．3 合成路线

2．4 金属铂(Ⅱ)配合物的合成和表征

2．4．1 配体的合成

2．4．2 金属铂(Ⅱ)配合物A的合成及表征

2．4．3 金属铂(Ⅱ)配合物B的合成及表征

2．4．4 金属铂(Ⅱ)配合物C的合成及表征

2．5 小结

第三章 铂(Ⅱ)配合物与G-四链体DNAs相互作用的研究

3．1 引言

3．2 研究方法

3．2．1 荧光共振能量转移熔点分析

3．2．2 PCR Stop分析

3．2．3 紫外可见吸收光谱

3．2．4 荧光光谱

3．2．5 圆二色谱

3．3 实验用品

3．3．1 实验材料

3．3．2 实验仪器

3．4 实验内容

3．4．1 溶液的配制

3．4．2 DNA的预处理

3．4．3 FRET melting实验

3．4．4 PCR Stop实验

3．4．5 紫外可见吸收滴定实验

3．4．6 荧光滴定实验

3．4．7 圆二色谱实验

3．5 实验结果与讨论

3．5．1 FRET melting实验

3．5．3 紫外吸收滴定实验

3．5．4 荧光滴定实验

3．5．5 CD实验

3．6 小结

第四章 铂(Ⅱ)配合物对端粒酶活性的影响

4．1 端粒酶活性的检测方法

4．2 端粒酶活性检测实验

4．2．1 实验用品

4．2．2 实验所用溶液的配制

4．2．3 TRAP实验

4．3 实验结果与讨论

4．4 小结

第五章 铂(Ⅱ)配合物对癌细胞增殖的影响

5．1 细胞增殖的检测方法

5．1．1 细胞活性检测方法

5．1．2 细胞周期分析方法

5．2 实验用品

5．2．1 实验材料

5．2．2 实验仪器

5．3 实验内容

5．3．1 实验准备

5．3．2 细胞培养

5．3．3 细胞活性检测

5．3．4 细胞周期分析

5．4 实验结果与讨论

5．4．1 金属铂(Ⅱ)配合物对细胞活性的影响

5．4．2 金属铂(Ⅱ)配合物对细胞周期的影响

5．5 小结

第六章 总结与展望

6．1 总结

6．2 展望

参考文献

附录

研究成果

致谢

个人简况

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