光诱导SNP的NO释放及其生物学应用研究

摘要

一氧化氮(N O)作为一种重要的信号分子，在多种生理生化过程包括血压的控制、神经系统的传输、免疫响应以及细胞凋亡等作用中都发挥着十分显著的作用。随着生物医学和疾病治疗方法的发展，光动力疗法已经成为继手术、放疗、化疗等传统方法之后的治疗肿瘤的另一种新型的技术手段。同时，光诱导NO的释放引起研究者的关注。开发适当的外源性NO供体，如何控制NO的定量释放，如何将NO输送到特定部位等问题成为亟待解决的重要问题。目前已经有多种NO的外源供体被应用于临床。硝普钠(Na2[Fe(CN)5NO]·2H2O，SNP)就是临床上常用的一种舒张血管的药物和NO供予体，对于血压的调节有着十分重要的作用。
　　在本文中，我们通过实验总结和分析了光诱导SNP在溶液中NO自由基释放的动力学过程，通过电子顺磁共振谱(ESR)证实了光诱导SNP的NO释放；利用NO自由基捕捉技术测定得到了N O自由基的特征信号；利用NO选择性电极测定技术检测了光激发SNP释放NO量的多少，初步获得了定量调控NO释放的基本方法；研究了在光照条件下，SNP与生物大分子DNA之间的相互作用，并分析了其中可能的作用机制；研究了光照条件下，SNP对肿瘤细胞生长的抑制情况，为光诱导SNP细胞生物学效应的分子机制研究和临床应用，提供了新的依据。
　　本文的内容主要由以下五部分构成：
　　第一：介绍了近年来有关光动力疗法的研究进展、综述了国内外有关NO的研究动态以及SNP的理化性质和在生物学研究中的重要作用意义。
　　第二：利用电子自旋共振技术(ESR)和NO自由基捕捉技术，证实了光诱导SNP溶液中N O的释放；利用NO选择性电极测定方法，定量测定了不同波长的光激发条件下，SNP在溶液中NO的释放量，获得了利用光激发调控SNP溶液中NO释放量的基本方法。
　　第三：通过琼脂糖凝胶电泳法研究了在光照条件下，SNP对pBR322DNA的切割作用，并分析了其作用机制。
　　第四：利用CCK-8法检测了不同浓度的SNP在光照和未光照条件下对三种人源肿瘤细胞（Hela、HepG2和MCF-7）生长的抑制作用，为疾病治疗新方法的研究提供了新的线索。
　　第五，总结全文并对下一步工作进行展望。

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第一章 绪论

1. 1 课题研究目的和意义

1. 2 课题研究现状

1. 3 本论文主要内容和贡献

第二章 光诱导SNP在溶液中NO的释放

2. 1 引言

2.2 电子自旋共振(ESR)技术检测NO

2. 3照射光源的构建

2.4 SNP的吸收光谱测定

2. 5 NO选择性电极测定

2. 6本章总结

第三章 光诱导SNP对DNA的切割作用

3. 1引言

3. 2 琼脂糖凝胶电泳法

3. 3 本章总结

第四章 光诱导SNP对肿瘤细胞生长的抑制作用

4. 1 引言

4. 2 检测方法

4. 3 细胞培养实验

4. 4 膜片钳实验的准备

4. 5 本章总结

第五章 总结与展望

参考文献

攻读学位期间取得的研究成果

致谢

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