基于新一代测序技术的中药制剂质量评价方法

摘要

中药制剂是在中医理论指导下，按照“君臣佐使”的组方原则，选择适宜韵药味和剂量，制成随时可以取用的现成药品。目前，我国中药制剂并不被欧美国家所认可，主要原因之一在于其质量评价体系不完善。建立科学、合理的中药制剂质量评价体系是实现中药现代化、产业化和国际化的关键之一。中药制剂传统质量评价方法(显微鉴别，TLC鉴别和HPLC含量测定等）的局限性在于难以区分形状相似的近缘物种及含有相同主要化学成分的物种，不能检测制剂中的未知生物成分，这些瓶颈制约着中药制剂走向国际化。基于新一代高通量测序技术的元基因组研究方法是目前认识、分析生物混合体系结构和功能最有效、最重要的方法之一。本课题选择六味地黄丸作为研究对象，尝试将高通量元基因组研究思路与技术应用于中药制剂研究中，即对中药制剂的全部生物成分进行定性分析，然后结合传统HPLC评价方法，以期建立一种全面、准确、有效的中药制剂质量评价新方法。
　　目的:使用新一代测序技术以及高效液相色谱指纹图谱技术对不同厂家、不同批次的六味地黄丸样品进行质量评价。
　　方法:采用新一代测序技术对六味地黄丸样品中的处方物种和杂质物种进行鉴定，以转录间隔区ITS2基因和质体trnL基因的p-loop区作为分子标记片段，对9个市售样品和一个自制样品进行扩增和测序，共得到了90，000多条高质量的序列。此外，通过HPLC指纹图谱技术对不同六味地黄丸样品的化学组成进行了分析和比较。
　　结果:基于新一代测序技术的方法，确定了六味地黄丸中的部分处方物种成分以及杂质成分，并发现不同厂家的六味地黄丸的质量存在差异;HPLC指纹图谱的结果进一步表明，不同厂家六味地黄丸样品的一致性有一定的区别，两种方法的质量评价结果一致。
　　结论:新一代测序方法可以有效的鉴定六味地黄丸中的生物成分。中药制剂的质量评价应既包含化学成分的分析，又包括物种成分的鉴定。因此，将基于新一代高通量测序技术的物种成分鉴定法与化学成分分析法相结合，将进一步提高中药制剂成分分析和质量评价的准确性。

目录

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摘要

缩写符号说明

前言

第一章 中药制剂质量评价方法研究进展

1．1 传统的中药复方制剂质量评价方法

1．2 指纹图谱法在中药制剂质量评价中的应用

1．3 基因组学方法及新一代测序技术在中药制剂质量评价中的应用

第二章 基于新一代测序技术的中药制剂质量分析

2．1 六味地黄丸基因组提取方法优选

2．2 基于新一代测序技术的六味地黄丸成分分析

第三章 基于HPLC指纹图谱的六味地黄丸质量分析

3．1 实验部分

3．2 实验结果

3．3 小结与讨论

第四章 结语

参考文献

综述

攻读学位期间取得的研究成果

致谢