胃癌组织中DCC mRNA表达变化及意义

摘要

结直肠癌缺失基因（deleted colorectal carcinoma DCC）是迄今为止发现的最长的抑癌基因，位于人类染色体18q21.3，其编码一种分子量为190 kD的跨膜磷酸化蛋白。
　　目的：
　　胃癌是常见的恶性肿瘤之一，预后较差，进展期胃癌患者术后5年生存率为20％~50%。本课题检测胃癌组织中DCC基因mRNA的表达水平，探讨其与胃癌发生、发展及临床病理特征的关系，并且为胃癌的早期诊断、治疗及预后提供参考依据。
　　方法：
　　胃癌患者52例，手术中留取胃癌组织与癌灶旁5 cm以上的正常胃组织标本。从两组标本中分别提取总RNA；应用RT-PCR两步法和目的基因片段克隆测序的方法，检测DCC基因mRNA在胃癌组织与癌旁正常组织中的表达水平。
　　采用SPSS20.0统计学软件。正常胃组织与胃癌组织中DCC mRNA表达阳性率比较采用Fisher确切概率法；不同临床病理类型的病人胃癌组织中DCC mRNA相对表达量比较采用t检验及方差分析。P＜0.05说明差异有统计学意义。
　　结果：
　　1.基因克隆及序列测定
　　PCR产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳分离，依据相对分子量的大小(215 bp)确定目的条带，回收目的基因(DNA凝胶回收试剂盒Omega公司)。将回收的目的基因与pMD19-T载体连接后，转化至感受态大肠杆菌DH5α菌中，经氨苄西林抗性及蓝白斑筛选出阳性菌落，每个PCR产物挑选5～12个白色菌落，送上海生工生物工程有限公司测序。确定PCR扩增片段为目的基因DCC及内参GAPDH。
　　2.DCC基因表达结果
　　52例癌旁组织标本中均检测到DCC基因的表达；52例胃癌组织标本中，有44例不同程度的表达DCC基因，阳性表达率为84.6％，两者比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。以GAPDH为标准参照，检测DCC mRNA相对表达水平，胃癌组织为0.555±0.087，癌旁组织为0.796±0.095，两者比较，差异有统计学意义(P＜0.01)。
　　3.DCC基因mRNA表达与临床、病理参数的关系
　　将同一例病人检测的DCC mRNA相对水平相比，即检测mRNA相对水平=(RT-PCR产物电泳带的净光密度值)/(GAPDH RT-PCR产物电泳带的净光密度值），所得数值与临床、病理参数分组进行统计学处理。可以看出，不同性别胃癌患者，两组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)；不同年龄的胃癌患者中，＜60岁组，其DCC基因mRNA的相对表达水平是0.75±0.15，≥60岁组，其DCC基因mRNA的相对表达水平是0.84±0.09，两组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)；不同病变部位的胃癌组织中，DCC基因mRNA在贲门组的表达水平是0.85±0.13，在胃体组的表达水平是0.78±0.10，在胃窦组的表达水平是0.78±0.12，三组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。DCC基因mRNA在淋巴结转移阴性组中的表达水平是1.07±0.10，在淋巴结转移阳性组中的表达水平是0.59±0.08，两组比较，差异具有统计学意义(P＜0.05)。不同TNM分期的胃癌患者中， DCC基因mRNA在I期、II期患者的表达水平是1.21±0.11，在III期、Ⅳ期患者的表达水平是0.57±0.08，两组比较，差异具有显著的统计学意义(P＜0.005)。不同病理学分级、组织学分化程度胃癌患者中，DCC基因mRNA在高分化及中分化胃癌患者的表达水平是1.05±0.10，在低分化（未分化）胃癌患者的表达水平是0.58±0.05，两组比较，差异具有统计学意义( P＜0.05)。
　　结论：
　　1.DCC基因在癌旁组织中均检测到阳性表达；
　　2.胃癌组织中DCC基因mRNA的表达水平较癌旁正常组织中明显下降；表明 DCC基因mRNA的低表达可能是胃癌发生发展的影响因素。
　　3.胃癌组织中DCC基因mRNA的相对表达水平与肿瘤大小、病人年龄及病变部位没有相关性。
　　4.胃癌组织中DCC基因mRNA的相对表达水平与淋巴结转移呈负相关，但与淋巴结转移数目无明显相关性。
　　5.胃癌组织中DCC基因mRNA的相对表达水平与TNM分期呈负相关，与病理学分级、组织学分化程度呈正相关。说明DCC基因mRNA在胃癌侵袭转移等过程中有一定影响，将来可能成为检验胃癌进展的肿瘤标记物之一。

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引言

材料与方法

1材料

1.1 一般资料

1.2组织RNA提取及RT-PCR用材料

1.3 引物设计合成

1.4 RT-PCR实验材料

1.5琼脂糖凝胶电泳材料

1.6基因克隆材料

2 方法

2.1 标本收集

2.2 DCC 基因mRNA的检测

2.3 目的基因片段克隆测序

2.4结果分析

结果

1.基因克隆及序列测定

2.RT-PCR的检验结果

2.1 DCC基因 mRNA 阳性及阴性表达的判断

2.2 DCC mRNA在胃癌及癌旁组织中的表达情况

2.3胃癌组织中DCC mRNA表达水平与临床、病理特征的关系

讨论

1．DCC 基因结构和功能

2. DCC基因与肿瘤的关系

3. DCC基因与胃癌的关系

结论

参考文献

附录

综述: DCC基因与胃癌关系的研究进展

攻读学位期间取得的研究成果

致谢