贝伐单抗对人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响

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摘 要

Effect of bevacizumab on apoptosis of human retina

Abstract

主要符号表

引 言

第一章 实验材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 细胞系

1.1.2 实验仪器

1.1.3 实验耗材

1.1.4 实验试剂

1.1.5 主要溶液的配制

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养步骤

1.2.1.1 细胞复苏

1.2.1.2 细胞传代

1.2.1.3 细胞冻存

1.2.1.4 细胞计数

1.2.1.5 细胞铺板

1.2.1.6 实验分组

1.2.2 ARPE-19细胞活性检测（CCK8法）

1.2.2.1 CCK8法检测ARPE-19细胞活性

1.2.4 流式细胞仪检测贝伐单抗处理不同时间后ARPE-19细胞的凋亡率

1.2.5 Real-time PCR检测各实验组P53、TP53INP1、Bax及Bcl-2 m

1.2.5.1 PCR引物

1.2.5.2 总RNA提取

1.2.5.3 反转录反应

1.2.5.5 溶解曲线

1.2.6 Western blot检测各实验组P53、TP53INP1、Bax及Bcl-2蛋白的

1.2.6.1 蛋白样品制备

1.2.6.2 蛋白定量步骤

1.2.6.3 配制SDS-PAGE凝胶

1.2.6.4 电泳

1.2.6.5 湿法转膜

1.2.6.6 发光显影

1.2.6.7 二次发光显影

1.2.7 统计学分析

第二章 结果

2.1 ARPE-19细胞的培养

2.2 CCK8法检测贝伐单抗处理不同时间ARPE-19细胞的细胞活性

2.3 贝伐单抗处理不同时间后各组ARPE-19细胞的形态变化

2.4 贝伐单抗处理不同时间后各组ARPE-19细胞的凋亡率

2.5 RT-PCR检测各实验组ARPE-19细胞P53 mRNA的相对表达量

2.6 RT-PCR检测各实验组ARPE-19细胞TP53INP1 mRNA的相对表达量

2.7 RT-PCR检测各实验组ARPE-19细胞Bax mRNA的相对表达量

2.8 RT-PCR检测各实验组ARPE-19细胞Bcl-2 mRNA的相对表达量

2.9 Western blot检测各实验组ARPE-19细胞Acetyl-P53蛋白的表达

2.10 Western blot检测各实验组ARPE-19细胞TP53INP1蛋白的表达

2.11 Western blot检测各实验组ARPE-19细胞Bax蛋白的表达

2.12 Western blot检测各实验组ARPE-19细胞Bcl-2蛋白的表达

第三章 讨论

第四章 结论

参考文献

致 谢

附 录

一、在校期间发表的学术论文：