栉孔扇贝大规模死亡时期体内病毒样粒子的鉴定与蛋白组分的初步分析

摘要

2002-2003年扇贝大规模死亡时期,自青岛太平角养殖海区采集患病栉孔扇贝样品.通过蔗糖梯度离心、电镜负染观察、SDS-PAGE等方法对病毒的粒子的纯化、内部结构、蛋白质组成等进行了研究.1、通过差速离心和两次不连续蔗糖梯度离心成功分离纯化栉孔扇贝病毒样颗粒.经电镜检测得知,32.5﹪-35﹪的蔗糖界面处,35﹪-37.5﹪的界面处,以及37.5﹪-40﹪的界面处的乳白色条带均有病毒分布.通过对病毒的形态学和结构学比较观察,依据病毒的分类学特征,推测:32.5﹪-35﹪界面层含量为82.5﹪的病毒样粒子为副粘病毒粒子;35﹪-37.5﹪界面层含量为88.5﹪的病毒样粒子为冠状病毒粒子.2、通过电镜负染,SDS-PAGE等技术对栉孔扇贝中发现的冠状样病毒粒子的超微结构和蛋白组成成分进行了观察和分析.通过对比其他冠状病毒的结构和成分分析,初步建立了栉孔扇贝冠状病毒粒子的结构模式.确定了两种内部核心结构蛋白成分,参考冠状病毒科粒子结构蛋白的大小和定位,同时对比几种已知动物和人冠状病毒的蛋白分子量,确认分子量为42.5KD的是M蛋白,是构成ICS的主要蛋白;另一种分子量为58KD的为核蛋白N.两种纤突蛋白成分,确认分子量为151KD的是S蛋白,构成病毒的长纤突(20mm),另一种是分子量为60KD的HE蛋白.3、通过电镜负染,SDS-PAGE等技术对栉孔扇贝中发现的副粘病毒粒子的超微结构和蛋白组成万分进行了观察和分析.通过对比副粘病毒科的其他病毒科的其他病毒粒子的结构和万分分析,初步探讨了栉孔扇贝副粘病毒粒子的结构模式,以及球形粒子与丝状体的关系.得到两种纤突蛋白成分和一种核衣壳结构蛋白成分.确认分子量为62KD的蛋白就是病毒的核衣壳NP蛋白;分子量为74KD的是附着糖蛋白,是构成副粘病毒8-10nm纤突的蛋白组分,分子量为56KD的蛋白经对比确定为副粘病毒的F蛋白.

目录

摘要

Abstract

第一章前言海洋贝类病毒性病原研究进展

第二章栉孔扇贝大批死亡时期病毒的提取及鉴定

第三章冠状病毒样粒子的结构观察和蛋白组分分析

第四章副粘病毒样粒子的结构观察与蛋白组分分析

试剂与器材附录

参考文献

致谢