不同宿主及不同组织细胞与白斑综合症病毒（WSSV）的结合研究

摘要

该文利用病毒与其宿主细胞上受体蛋白的特异性结合原理,建立了用于研究WSSV与宿主细胞结合的荧光素标记法,该方法具有简单、快捷、经济性等优点.在该方法的基础上初步查明了在日本囊对虾、凡纳滨对虾和克氏原螯虾等宿主的不同组织细胞与WSSV的结合特异性.日本囊对虾的鳃细胞和血细胞能够与WSSV发生特异性的结合,肝胰腺细胞和肌细胞与WSSV没有该结合关系,该特异性的结合关系反映出组织细胞上存在有病毒特异性的受体蛋白.凡纳滨对虾和克氏原螯虾二者宿主不同组织细胞与WSSV的结合结果与日本囊对虾宿主不同组织细胞的结合结果存在着相似性和一致性,凡纳滨对虾和克氏原螯虾的鳃细胞、血细胞和甲壳下表皮组织与WSSV产生了特异性的结合,肌细胞和肝胰腺细胞没有此结合关系,不仅查明了WSSV在二者宿主上不同组织细胞结合的特异性,而且初步弄清了WSSV在不同宿主相同组织细胞上的结合芡性,可以得出病毒侵染组织细胞的共同性,加速病毒受体的确定和分离工作.为了查明WSSV在不同宿主不同组织细胞上的结合活性高低,又分别提取了各宿主的组织细胞膜与WSSV进行了结合试验.该文着重查明了以上七种宿主及其不同组织细胞与WSSV结合关系,并进一步比较了提取各种组织细胞膜与WSSV的结合活性,其结果显示了日本蟳、卤虫和藤壶等宿主的结合活性较高,凡纳滨对虾、克氏原螯虾和桡足类等宿主的结合活性低于前三者,不仅说明了卤虫和藤壶属于WSSV的侵染宿主,而且证明了二者的结合活性明显高于其它宿主.

目录

摘要

Abstract

前言

1关于对虾白斑病的研究概况

2 WSSV的流行病学

3 WSSV的结构组成与基因组学

4 WSSV受体蛋白的研究

参考文献

第一章：用于研究白斑综合症病毒(WSSV)与宿主细胞结合的荧光素标记法

摘要

Abstract

1材料和方法

1.1实验材料

1.2 WSSV的提取

1.3 WSSV的荧光素标记

1.4 WSSV蛋白含量的测定

1.5标记病毒感染活性的验证

1.6不同组织细胞的原代培养

1.7标记WSSV与细胞的结合

2结果

2.1病毒的提纯

2.2病毒的标记

2.3病毒蛋白含量的测定

2.4荧光素标记病毒活性的验证

2.5细胞的原代培养

2.6标记病毒和细胞的结合

3讨论

参考文献

第二章：凡纳滨对虾宿主与白斑综合症病毒(WSSV)结合的研究

第一节：凡纳滨对虾不同组织细胞与WSSV的结合研究

摘要

Abstract

1材料与方法

2结果

3讨论

第二节：凡纳滨对虾不同组织细胞膜与白斑综合症病毒(WSSV)的结合研究

摘要

Abstract

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

第三章：克氏原螯虾宿主不同组织细胞与白斑综合症病毒(WSSV)的结合研究

第一节：克氏原螯虾不同组织细胞与WSSV的结合研究

摘要

Abstract

1材料与方法

2结果

3讨论

第二节：克氏原螯虾不同组织细胞膜与WSSV的结合研究

摘要

Abstract

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

第四章：日本蟳不同组织细胞膜与WSSV结合研究

摘要

Abstract

1材料与方法

1.1试验材料

1.2 WSSV的提取及地高辛(DIG)标记

1.3日本蟳不同组织细胞膜的提取

1.4不同组织细胞膜和WSSV的蛋白含量测定

1.5组织细胞膜的SDS-PAGE分析

1.6不同组织细胞膜与WSSV的结合

1.7日本蟳鳃膜和血细胞膜对凡纳滨对虾鳃膜与WSSV结合活性的影响

2结果

2.1 WSSV的提取

2.2不同组织细胞膜的提取

2.3不同组织细胞膜和WSSV蛋白含量的测定

2.4组织细胞膜的SDS-PAGE分析

2.5不同组织细胞膜与WSSV的结合

2.6日本蟳鳃膜和血细胞膜对凡纳滨对虾鳃膜与WSSV结合的影响作用

3讨论

参考文献

第五章：桡足类细胞膜与白斑综合症病毒(WSSV)结合研究

摘要

Abstract

1材料与方法

1.1实验材料

1.2凡纳滨对虾鳃细胞膜和桡足类细胞膜的提取

1.3 WSSV的提取及其地高辛(DIG)标记

1.4 WSSV和桡足类细胞膜DIG标记前后蛋白含量的测定

1.5桡足类细胞膜的SDS-PAGE分析

1.6 WSSV、桡足类细胞膜和BSA的DIG标记即其产量的测定

1.7桡足类细胞膜与WSSV的结合分析

1.8桡足类细胞膜与WSSV的竞争性结合分析

1.9凡纳滨对虾鳃细胞膜对桡足类细胞膜与WSSV结合的竞争性抑制

1.10表面活性剂(Tween-20和Triton X-100)对桡足类细胞膜与WSSV结合活性的影响

2结果与分析

2.1桡足类浮游生物形态学鉴定

2.2凡纳滨对虾鳃膜与桡足类细胞膜的提取

2.3桡足类细胞膜的SDS-PAGE分析

2.4 WSSV的提取

2.5地高辛标记产量的测定

2.6 WSSV和桡足类细胞膜DIG标记前后的蛋白含量测定

2.7 DIG标记的WSSV与桡足类细胞膜结合分析

2.8未标记的WSSV对DIG标记的WSSV与桡足类细胞膜结合的竞争抑制试验

2.9凡纳滨对虾鳃细胞膜对WSSV与桡足类细胞膜结合的封闭作用

2.10表面活性剂处理桡足类细胞膜后对其结合活性的影响

3讨论

参考文献

第六章：藤壶组织细胞膜与白斑综合症病毒(WSSV)的结合研究

摘要

Abstract

1材料与方法

1.1材料的采集

1.2凡纳滨对虾鳃膜和藤壶组织细胞膜的提取

1.3 WSSV的提取及其地高辛(DIG)标记

1.4藤壶细胞膜的SDS-PAGE分析

1.5藤壶组织细胞膜，凡纳滨对虾鳃膜和WSSV蛋白含量的测定

1.6 WSSV和牛血清白蛋白(BSA)的DIG标记即其产量的测定

1.7藤壶组织细胞膜与WSSV的特异性结合

1.8凡纳滨对虾鳃膜对WSSV与藤壶组织细胞膜结合的作用影响

2结果

2.1凡纳滨对虾鳃膜与藤壶组织细胞膜的提取

2 2藤壶组织细胞膜的SDS-PAGE结果分析

2.3凡纳滨对虾鳃膜，藤壶组织细胞膜和WSSV蛋白含量的测定

2.4藤壶组织细胞膜与WSSV的特异性结合

2.5凡纳滨对虾鳃膜对藤壶组织细胞膜与WSSV结合的影响

3讨论与分析

参考文献

第七章：卤虫细胞膜与白斑综合症病毒(WSSV)的结合研究

摘要

Abstract

1材料与方法

1.1卤虫的孵化

1.2卤虫细胞膜的提取

1.3 WSSV的提取与DIG标记

1.4 WSSV和卤虫细胞膜DIG标记前后蛋白含量的测定

1.5卤虫细胞膜的SDS-PAGE分析

1.6卤虫细胞膜与WSSV的特异性结合

1.7凡纳滨对虾鳃膜对卤虫组织膜和WSSV结合的影响

2结果

2.1卤虫的孵化

2.2卤虫细胞膜的提取

2.3 WSSV的提取

2.4卤虫细胞膜和WSSV蛋白含量的测定

2.5卤虫细胞膜的SDS-PAGE

2.6卤虫细胞膜与DIG标记WSSV的结合分析

2.7凡纳滨对虾鳃膜对卤虫细胞膜和WSSV结合的影响作用

3讨论

参考文献

第八章：不同宿主及不同组织细胞膜与WSSV结合活性的比较

摘要

Abstract

1材料与方法

1.1实验材料

1.2 WSSV的提取及地高辛(DIG)标记

1.3不同宿主不同组织细胞膜的提取

1.4不同组织细胞膜蛋白含量的测定

1.5不同组织细胞膜与WSSV结合活性的比较

2结果

2.1 WSSV的提取及DIG标记

2.2不同组织细胞膜的提取

2.3不同组织细胞膜蛋白含量的测定

2.4不同组织细胞膜与WSSV结合活性比较

3讨论

参考文献

致谢