异源冷冻精子诱导大菱鲆和大西洋牙鲆雌核发育的研究

摘要

本文探索了异源冷冻精子诱导大菱鲆(Scophthalmus maximus)和大西洋牙鲆(Paralichthys dentatus)雌核发育的条件，建立了采用冷冻保存的鲈鱼(Lateolabrax japonicus)精液诱导这几种海水鱼类雌核发育的方法，并采用不同的方法对雌核发育后代做了分析鉴定。为大规模培育这几种鱼的全雌菌种奠定了基础。研究结果如下： 1.鲈鱼精子，不管是否经过紫外线照射处理，都可以刺激大菱鲆卵开始胚胎发育过程，并且两组卵的胚胎发育过程完全相同。卵在(13±0.2)℃海水中大约95小时至出膜前期。由于没有经过染色体加倍化处理，两组胚胎均发育畸形，呈现出典型的单倍体综合症。实验组未发现有正常形态的仔鱼。从而确定，鲈鱼精子与大菱鲆卵子杂交所得后代即为大菱鲆的单倍体。通过对雌核发育冷休克起始时间，冷休克温度和冷休克持续时间的筛选和优化，确定了利用鲈鱼未灭活精子诱导大菱鲆卵雌核发育的最佳条件是：在13℃下授精6min后，用(-1～0)℃的海水对卵进行持续25min的冷休克处理。对孵出的仔鱼养殖5到7天，单倍体苗会全部死掉，剩下的正常形态苗种即为大菱鲆雌核二倍体。比较正常二倍体、单倍体和人工诱导雌核发育二倍体胚胎的发育速度和形态学特征，结果表明，不同胚胎发育速度有明显区别，表现为：正常二倍体和单倍体>人工诱导雌核发育二倍体。形态学上单倍体胚胎表现为头小，尾短，活动能力弱，破膜困难，人工诱导雌核发育二倍体胚胎则同正常二倍体胚胎同期特征一致。 2.使用鲈鱼精子经紫外照射灭活后与大西洋牙鲆卵受精，按照受精后5min开始对卵进行3℃、30min的冷休克处理，获得了大批的仔鱼。对后代进行染色体技术鉴定，结果表明，未经冷休克处理的胚胎染色体数目为n=24，是大西洋牙鲆单倍体；而经冷休克诱导处理所得到的鱼苗染色体数为2n=48，即为大西洋牙鲆雌核发育鱼苗。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

文献综述

1鱼的性别控制研究进展

1.1鱼类的性别

1.2鱼类性别控制的意义

1.3鱼类性别控制的常用方法

2鱼类雌核发育研究进展

2.1鱼类雌核发育的诱导方法

2.2雌核发育后代的鉴定及遗传分析

2.3雌核发育的外界制约因素

2.4雌核发育个体的生长与发育

2.5潜在应用

1异源冷冻精子诱导大菱鲆雌核发育

1.1诱导大菱鲆雌核发育异源精子的选用

1.1.1材料和方法

1.1.2结果

1.1.3 讨论

1.2大菱鲆单倍体的制备

1.2.1材料和方法

1.2.2结果

1.2.3讨论

1.3人工诱导大菱鲆雌核发育二倍体冷休克条件的优化

1.3.1材料和方法

1.3.2实验结果

1.3.3讨论

1.4大菱鲆单倍体，雌核发育二倍体以及正常二倍体比较

1.4.1方法

1.4.2结果

1.4.3讨论

2异源冷冻鲈鱼精子诱导大西洋牙鲆雌核发育

2.1实验材料和方法

2.1.1实验材料

2.1.2实验方法

2.2结果

2.2.1杂交和雌核发育诱导实验

2.2.2染色体鉴定

2.3讨论

3结论

3.1鱼类雌核发育异源精子地选择

3.2雌核发育诱导的冷休克条件

3.3雌核发育后代的鉴定

3.4雌核发育在建立纯系上的应用

3.5雌核发育在鱼类性别控制和全雌育种上的意义和作用

参考文献

致 谢