注射病原菌、盐度变化对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响

摘要

本文研究了注射病原菌、盐度变化对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响。主要内容包括：①凡纳滨对虾血蓝蛋白酚氧化酶活性的研究；②注射病原菌对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响；③盐度变化对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响。主要研究结果如下： 1.凡纳滨对虾血蓝蛋白酚氧化酶活性的研究 本实验选择A、B、C等7种抑制剂为材料，以凡纳滨对虾血细胞为研究对象，最终筛选出能够有效抑制凡纳滨对虾血细胞酚氧化酶活力而不抑制血蓝蛋白酚氧化酶活力的抑制剂－－A并确定其适合的抑制浓度为10μM。在此基础上，采用抑制剂，结合native－PAGE电泳与L－DOPA活性染色的方法，证明了凡纳滨对虾正常机体血蓝蛋白(分子量450kD)表现出酚氧化酶活性，并且通过SDS－PAGE与L－DOPA活性染色相结合的方法，证实血蓝蛋白展现酚氧化酶活性的单体是75 kDa亚基。 2.注射病原菌对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响 本文研究了注射病原菌对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活力的影响。结果表明：注射哈维氏弧菌对凡纳滨对虾血蓝蛋白含量、p75和p77亚基、mRNA表达以及血淋巴、血细胞和血蓝蛋白酚氧化酶活力的影响显著(P<0.05)，而对照组无显著变化。血蓝蛋白含量和p75、p77亚基表达在0－24h内呈峰值变化，其中血蓝蛋白含量在6h内逐渐下降、且6h时达到最低值，而p75、p77亚基表达在3h内无明显变化，然后均表现为逐渐上升趋势，各指标在12h时达到最大值，而且亚基表达与注射哈维氏弧菌浓度呈正相关，24h后各指标趋于稳定，与对照组无显著差异。在注射哈维氏弧菌短时间内血蓝蛋白mRNA表达呈迅速上升趋势，其中注射6×106cells/mL处理组mRNA表达在6h内呈峰值变化，3h时达到最大值，6－48h内保持稳定，但仍明显高于对照组水平(P<0.05)，而注射6×105cells/mL处理组tuRNA表达量虽然增加，但只在6h达到最大值时与对照组差异显著(P<0.05)，其余时间均与对照组差异不显著。血淋巴、血细胞和血蓝蛋白注射病原菌、盐度变化对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响酚氧化酶活力分别在12h、24h内呈峰值变化，分别于3h、6h、3h时达到最大值、最小值和最大值，然后各指标分别于12h、24h后恢复至对照组水平。由此说明凡纳滨对虾在病原入侵下启动了血蓝蛋白的合成，血蓝蛋白mRNA表达上调，新合成的血蓝蛋白主要执行酚氧化酶等免疫功能，协同机体其它免疫因子共同参与机体的免疫防御。 3.盐度变化对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响。 本文研究了盐度变化(盐度34→30，26)对凡纳滨对虾血蓝蛋白mRNA、p77和p75亚基表达水平及血蓝蛋白酚氧化酶活性的影响。结果显示： 盐度变化对凡纳滨对虾血蓝蛋白含量、p75和p77亚基以及血蓝蛋白mRNA的表达影响显著(P<0.05)，而对照组无显著变化。血蓝蛋白含量、p75和p77亚基表达在0－48h内呈峰值变化，各指标在12h内均表现为逐渐上升趋势、12h时达到最大值，并且与盐度变化呈明显的正相关性；之后逐渐下降，血蓝蛋白含量、p75和p77亚基表达分别于24h、24h和48h趋于稳定，与对照组无显著差异。在盐度变化12h内血蓝蛋白mRNA表达呈迅速上调趋势，12h时达到最大值，48－72h内稳定于对照组水平(P>0.05)。 盐度变化对凡纳滨对虾血淋巴、血细胞和血蓝蛋白酚氧化酶活力影响显著(P<0.05)，而对照组无显著变化。各指标在48h内呈峰值变化，分别于12h时达到最大值或最小值，且与盐度变化呈明显的正负相关性；之后各指标趋于稳定，其中血淋巴、血细胞酚氧化酶活力24h后保持稳定，与对照组无明显差异，而血蓝蛋白酚氧化酶活力于48h后恢复至对照组水平。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章文献综述

1.血蓝蛋白的结构和功能

2.血蓝蛋白的免疫活性

2.1血蓝蛋白的酚氧化酶活性

2.2血蓝蛋白的抗菌肽活性

2.3血蓝蛋白的凝集活性

3.盐度对对虾免疫的影响

4.结语

第二章凡纳滨对虾血蓝蛋白酚氧化酶活性的研究

第一节凡纳滨对虾酚氧化酶抑制剂的筛选

1材料与方法

2实验结果

3讨论

第二节凡纳滨对虾血蓝蛋白酚氧化酶活性的研究

1材料与方法

2实验结果

3讨论

第三章注射病原菌对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响

1材料与方法

1.1实验材料

1.2实验方法

1.3数据处理与分析

2实验结果

2.1注射哈维氏弧菌对凡纳滨对虾血蓝蛋白含量、亚基和mRNA表达水平的影响

2.2注射哈维氏弧菌对凡纳滨对虾血淋巴、血细胞和血蓝蛋白酚氧化酶活力的影响

3讨论

第四章盐度变化对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响

1材料与方法

1.1实验材料

1.2实验方法

1.3数据处理与分析

2实验结果

2.1盐度变化对凡纳滨对虾血蓝蛋白含量、亚基和mRNA表达水平的影响

2.2盐度变化对凡纳滨对虾血淋巴、血细胞和血蓝蛋白酚氧化酶活力的影响

3讨论

结论

参考文献

致谢