迟缓爱德华氏菌唾液酸酶的克隆表达与功能研究

摘要

细菌的唾液酸酶是一类糖苷水解酶，在细菌对宿主细胞和组织的侵染过程中发挥着重要作用。本研究中，我们采用牙鲆为动物模型，初步探索迟缓爱德华氏菌唾液酸酶NanA的功能。生物信息学分析表明，NanA由670个氨基酸组成，含有唾液酸酶结构域和自体运输结构域，前者包含了细菌唾液酸酶的典型结构：5个Asp box，1个PIP motif和保守的催化中心。我们对其唾液酸酶结构域进行了体外重组表达，纯化得到的重组蛋白rNanA具有水解唾液酸底物的水解酶活性。为了进一步检测NanA的功能，我们构建了nanA的突变菌株TXnanA。毒力分析实验表明，与野生型菌株TX01相比，突变型菌株TXnanA对牙鲆组织的感染能力大幅下降，抵抗牙鲆巨噬细胞活性氧的杀伤能力以及在巨噬细胞中的生存复制能力都明显降低。以rNanA作为亚单位疫苗，能够有效的保护牙鲆抵抗迟缓爱德华氏菌的感染。综上所述，NanA是一种毒力相关因子，在迟缓爱德华氏菌的致病过程中发挥了重要作用。