栉孔扇贝(Chlamys farreri)性腺发育相关基因的筛选及Cf-phb2在精巢中的表达分析

摘要

性腺发育是发育生物学研究的重要领域之一,这是一个多基因参与调控的过程。PHB(Prohibitin)被认为参与多种生物过程,包括抑制某些转录因子的转录活性、对细胞周期的负调控作用以及抑制肿瘤和细胞凋亡等。本研究采用半定量RT-PCR技术对栉孔扇贝(Chlamys farreri)增殖期精、卵巢差异表达谱中的10个两性差异表达序列标签进行了验证;RACE技术获得phb2全长cDNA序列,采用半定量RT-PCR、real-time PCR和原位杂交技术分析了该基因在栉孔扇贝中的空间表达以及各发育阶段精巢中的表达特征。主要结果如下:
　　半定量RT-PCR检测,确定栉孔扇贝10个两性差异表达序列标签中3个为卵巢高表达,4个为精巢高表达,一致率为40％。以其中一个精巢高表达标签(>F0BWI0G01A0M8X)序列为基础,RACE技术获得一个全长为2122 bp的cDNA序列,该序列含有开放阅读框882 bp,编码293个氨基酸;经过序列比对及同源性分析初步判定其为栉孔扇贝phb2基因,定名为Cf-phb2。
　　栉孔扇贝phb2的半定量RT-PCR检测结果显示,其在各器官中均有表达,以精巢中表达量最高。实时定量RT-PCR检测发现,Cf-phb2在栉孔扇贝4个发育时期(休止期、增殖期、生长期和成熟期)的精巢中均有表达,其表达量随着精巢的发育逐渐增加。其中休止期精巢表达量最低,成熟期精巢表达量最高,成熟期精巢的表达量约是生长期的3倍,增殖期的15倍。原位杂交检测发现,栉孔扇贝phb2在精巢的各种生殖细胞(精原细胞、精母细胞、精细胞和精子)中均有阳性信号,且信号的强度随着精子发生(精原细胞-精母细胞-精细胞)而增强,但精子中的表达极微,暗示phb2可能参与栉孔扇贝精子发生过程。并推测其在精子发生过程中可能与抑制细胞增殖有关。

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第一章 前言

1 性腺发育相关基因的研究进展

1.1 脊椎动物性腺发育相关基因

1.2 无脊椎动物性腺发育相关基因

2 PHB家族基因的研究进展

2.1 PHB家族基因的序列特征

2.2 PHB家族成员的功能

3 本研究的目的和意义

第二章 栉孔扇贝性腺发育相关基因的筛选

1材料与方法

1.1实验材料

1.2 实验方法

2 结果与分析

2.1总RNA的质量

2.2栉孔扇贝增殖期精卵巢差异表达序列的检验

3讨论

第三章 栉孔扇贝phb2基因cDNA全长的克隆及表达

1材料与方法

1.1实验材料

1.2 实验方法

2 结果与分析

2.1 目的基因全长cDNA的克隆及其序列的生物信息学分析

2.2栉孔扇贝phb2基因的时空表达特征

3 讨论

3.1 栉孔扇贝phb2基因序列结构及同源性分析

3.2 Cf-phb2基因的时空表达规律及其在精子发生中的作用

3.3 Cf-phb2基因潜在的抑制细胞增殖的作用

总结

参考文献

个人简历

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