吡美莫司纳米胶束及纳米水凝胶用于干燥性角膜炎的治疗

摘要

本课题的主要工作是制备吡美莫司纳米聚合物胶束及纳米水凝胶，以治疗干燥性角膜炎。干燥性角膜炎（干眼症）是指泪液不足或泪液过度蒸发致使的，伴有眼部不适和眼表组织病变特征的疾病。其组织病理特征主要是角膜上皮细胞不正常扩增与分化，炎症细胞密度增加、炎症因子水平升高，结膜杯状细胞密度降低等。越来越多研究表明由淋巴细胞介导的炎症在干燥性角膜炎发挥重要作用。传统的治疗方法主要有无防腐剂的人工泪液及抗炎药物软膏剂，一些病人治疗后症状仍然会持续，甚至出现视力模糊。目前对于眼科局部用药，约90％药物从眼部溢出或眨眼流失，5％药物未能透过角膜障碍被全身吸收，生物利用度低于5％。因此，抗炎效果强及剂型适宜的药物亟待开发。
　　吡美莫司是大环内酯类抗菌药物子囊霉素的衍生物，可在纳摩浓度达到抗炎效果，是新一代免疫抑制类药物。其免疫抑制活性是通过与细胞内FK506结合蛋白特异性结合为复合物，该复合物可以抑制胞质内钙调神经磷酸酶活性，从而抑制下游的多炎症因子的mRNA的转录表达。但其水溶性低，难以透过角膜障碍，因此在眼科的应用受到了极大的限制。为了增加角膜渗透性，将吡美莫司物理包载于两亲性聚合物形成纳米胶束（10～50nm）。纳米载体给药不仅可以提高疏水性药物水溶性，而且可以对药物起到保护作用。同时，纳米胶束减少角膜刺激，提高角膜渗透性与角膜前滞留时间。纳米胶束载体材料减慢了药物释放速率，因此能达到缓释的目的。MPEG-PCL为两嵌段高分子材料，具有载药量、包封率高，生物可降解，与药物有良好相容性及无毒等优良特性。为了进一步增加药物角膜前滞留时间，本课题同时制备纳米温敏性水凝胶，室温下为溶胶，易于按比例配置混合;体温下则会呈凝胶态，有较好的生物粘附性，在靶标位置缓慢释药。
　　本课题采用固体分散法制备了吡美莫司纳米胶束，并对纳米胶束一系列体外特性进行表征。马尔文激光粒度测试纳米胶束粒径为37.85±1.2nm，多分散指数为0.181±0.023。透射电镜下，粒子大小均匀，形态圆整。X-ray单晶衍射结果显示纳米载体包覆性好。建立了吡美莫司的高效液相分析方法，并评价吡美莫司胶束的载药量与包封率，载药量为7.75％时，包封率为97.9％。绘制了PCL-PEG-PCL的溶胶-凝胶-溶胶三相图，制备纳米温敏性凝胶。分析了纳米胶束与纳米凝胶剂型的体外释放情况，结果显示纳米胶束及纳米水凝胶具有良好的缓释效果。
　　为了评价不同剂型的体内活性，本课题采用苯扎氯铵溶液建立干燥性角膜炎小鼠模型。分别采用纳米胶束、纳米水凝胶、吡美莫司蓖麻油基质滴眼剂及市售人工泪液予以治疗6天，期间采用1mm pH试纸测其泪液量，荧光染色裂隙灯下观察病情，处死小鼠后取其角膜，进行HE染色，观察形态，测量角膜上皮厚度，计炎症细胞数。结果显示，吡美莫司胶束在体内有良好的抗炎作用，提高了泪液量，抑制角膜细胞凋亡，抑制炎症细胞浸润。

目录

声明

摘要

0 前言

0．1 干燥性角膜炎发病机制及治疗现状

0．2 吡美莫司简介

0．3 纳米聚合物胶束

0．3．1 纳米聚合物载药方式

0．3．2 纳米聚合物胶束载体材料

0．3．3 纳米聚合物胶束制备方法

0．3．4 纳米聚合物胶束特性表征

0．3．5 纳米聚合物胶束释药机理

0．3．6 纳米聚合物胶束在眼科的运用

0．4 原位凝胶

0．4．1 原位凝胶类型

0．4．2 原位凝胶在眼科的应用

0．5 本课题的研究内容及意义

1 吡美莫司纳米胶束及温敏纳米水凝胶的制备及表征

1．1 实验材料、仪器及试剂

1．1．1 实验样品及试剂

1．1．2 主要实验仪器

1．2 实验方法与步骤

1．2．1 载吡美莫司MPEG-PCL聚合物胶束(PNM)的制备

1．2．2 载吡美莫司温敏纳米凝胶(PTH)制备

1．2．3 马尔文激光粒度测定

1．2．4 透射电子显微镜观察

1．2．5 X-RAY衍射图谱测定

1．2．6 吡美莫司高效液相色谱法分析方法的建立与验证

1．2．7 载药量与包封率的测定

1．2．8 体外释放曲线测定

1．3 结果与讨论

1．3．1 载药纳米聚合物胶束形态表征

1．3．2 载药纳米聚合物胶束包封性

1．3．3 纳米凝胶温敏特性及形态

1．3．4 吡美莫司高效液相色谱法方法建立结果

1．3．5 包封率与载药量结果

1．3．6 体外释放曲线测定结果

1．4 小结

2 干燥性角膜炎模型的建立及治疗

2．1 实验材料

2．1．1 实验试剂

2．1．2 实验仪器

2．1．3 实验动物

2．1．4 部分溶液和药物的配置

2．2 实验方法

2．2．1 干燥性角膜炎模型建立

2．2．2 治疗方法

2．2．3 泪液量的测试

2．2．4 角膜荧光染色检查

2．2．5 角膜组织切片检查

2．2．6 数据分析

2．3 实验结果

2．3．1 泪液量测量结果

2．3．2 角膜荧光染色检查结果

2．3．3 角膜上皮形态

2．4 讨论

2．5 小结

总结

参考文献

致谢

个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果