急性温度胁迫对妊娠期许氏平鲉血液生理和生殖内分泌机能的影响

摘要

本文以妊娠期的许氏平鲉（Sebastes schlegelii）为研究对象，运用内分泌学和分子生物学方法，对急性温度胁迫后许氏平鲉血液生理指标、血清性类固醇激素及脑和卵巢内生殖相关基因表达情况的变化进行了系统的探究和分析，得到如下结果:
　　1.急性温度胁迫对妊娠期许氏平鲉血液生理指标的影响
　　主要研究了急性温度胁迫对妊娠期许氏平鲉血清皮质醇和血液生理指标水平的变化，结果表明，在温度骤变后（急性高温胁迫25℃;急性低温胁迫7℃;对照温度16℃），许氏平鲉血清皮质醇(Cortisol，COR)和血糖(Glucose，GLU)含量迅速显著升高，血清蛋白和血脂水平发生明显变化，大量供能以维持机体内环境稳态。胁迫使得肝脏组织受到损伤，导致转氨酶由损伤肝细胞逸出进入血液，同时促使血细胞数量和血红蛋白(Hemoglobin，HGB)含量显著变化。研究发现，急性高温胁迫和急性低温胁迫对妊娠期许氏平鲉均具有显著影响，胁迫后恢复72h后，机体生理状态仍难以恢复至正常水平，且鱼体对急性高温胁迫表现出更剧烈的反应。这表明急性温度胁迫条件下鱼体的代谢情况和免疫机能发生了改变，可能会损害鱼类的健康状况和生理水平，也可能会间接影响鱼类的生殖过程。
　　2.急性温度胁迫对妊娠期许氏平鲉血清性类固醇激素和卵巢中生殖相关基因表达水平的影响
　　利用125I标记的放射免疫测定方法(RIA)和分子生物学方法分别测定了急性温度胁迫后妊娠期许氏平鲉血清中17β-雌二醇(17β-Estradiol，E2)、孕酮(Progesterone，P4)的含量变化及卵巢中性腺型P450芳香化酶(CYP19a1a)基因、雌激素受体（Estrogen receptors，ERs）和Foxl2基因表达水平的变化。结果表明，妊娠期许氏平鲉的芳香化酶具有温度敏感性。急性温度胁迫后，血清E2和ERα表达水平具有相似的变化趋势，但温度对二者的作用机制仍需深入探讨;ERβs受多种因素影响而呈现出不同的表达方式。血清P4作为17α-羟基-20β-双羟孕酮(17α-hydroxy-20β-dihydroprogesterone，DHP)的前体物质，可能在妊娠期也具有一定生理作用。转录因子Foxl2在急性温度胁迫下并未检测到显著变化，推测可能与其他一些调节因子有关。
　　总之，妊娠期许氏平鲉在受到急性温度胁迫后，其血清性类固醇和卵巢生殖相关基因表达水平均发生显著变化，且对急性高温胁迫表现出更剧烈的反应，所需要的恢复时间更长。水环境温度骤变对妊娠期亲鱼的卵巢生理机能造成了一定干扰，可能会对其生殖状况产生不利影响。
　　3.急性温度胁迫对妊娠期许氏平鲉脑中生殖相关基因表达水平的影响
　　检测了急性温度胁迫后妊娠期许氏平鲉脑中脑型P450芳香化酶(CYP19a1b)基因、ERs和Foxl2基因表达水平的变化。结果表明，与CYP19a1a相比，急性高温胁迫后，CYP19a1b在脑中的转录情况差异显著，发生了明显上升，推测可能是由于二者在不同组织中承担着不同的生理功能。在妊娠期许氏平鲉脑中，CYP19a1b、E2、ERα间形成了自动反馈调节，促进CYP19a1b的转录。而Foxl2在脑和卵巢中对芳香化酶的表达具有相似的上调作用。总之，急性高温胁迫对脑中生殖相关基因表达水平有显著影响。急性低温胁迫后相关基因转录水平变化不明显，具体机制还需要深入探讨。
　　4.总结
　　综上所述，本文探究了急性高温和低温胁迫对妊娠期许氏平鲉血液生理和生殖内分泌机能的影响，首次报道了温度对妊娠期许氏平鲉生殖机能的影响，对卵胎生鱼类的养殖具有重要的理论意义。研究发现，妊娠期许氏平鲉对高温胁迫更敏感，所需恢复期更长。在实际生产中，对于进入生殖期的雌鱼，应密切关注养殖水温的变化，减少温度应激。维持水温的相对恒定，才能够保证亲鱼胚胎发育和产仔进程的顺利进行。

目录

声明

摘要

前言

第一章 文献综述

1 温度对鱼类生理机能影响的研究进展

1．1 温度对鱼类血液生理指标的影响

1．2 温度对鱼类生殖机能的影响

2 鱼类生殖相关基因及性类固醇激素的研究进展

2．1 芳香化酶及其转录因子

2．2 性类固醇激素与雌激素受体

2．3 温度对生殖相关基因表达和性类固醇激素水平的影响

3 许氏平鲉的研究进展

3．1 许氏平鲉生物学特征

3．2 许氏平鲉国内外研究状况

4 本研究的目的与意义

5 技术路线

第二章 急性温度胁迫对妊娠期许氏平鲉血液生理指标的影响

1 材料与方法

1．1 实验鱼类

1．2 实验设计

1．3 样品采集与处理

1．4 血液样本分析

1．5 数据分析

2 结果

2．1 行为反应

2．2 血清COR和GLU水平

2．3 血清蛋白质水平

2．4 血清脂类水平

2．5 血清转氨酶活力

2．6 血细胞数量和HGB水平

2．7 血清无机离子水平

2．8 主成分分析

3 讨论

4 小结

第三章 急性温度胁迫对妊娠期许氏平鲉血清性类固醇和卵巢中生殖相关基因表达水平的影响

1 材料与方法

1．1 实验鱼类

1．2 实验设计

1．3 样品采集与处理

1．4 血清中E2和P4水平的测定

1．5 卵巢中CYP19a1a、Foxl2、ERa、ERp1和ERβ2表达水平的分析方法

1．6 数据处理

2 结果

2．1 血清E2和P4水平

2．2 卵巢中CYP19a1a和Foxl2基因表达水平

2．3 卵巢中ERα表达水平

2．4 卵巢中ERβs表达水平

3 讨论

4 小结

第四章 急性温度胁迫对妊娠期许氏平鲉脑中生殖相关基因表达水平的影响

1 材料与方法

1．1 实验鱼类

1．2 实验设计

1．3 样品采集与处理

1．4 脑中CYP19a1b、Foxl2、ERa、ERβ1和ERβ2表达水平分析方法

1．5 数据处理

2 结果

2．1 脑中CYP19a1b及Foxl2基因表达水平

2．2 ERα表达水平

2．3 ERβs表达水平

3 讨论

4 小结

第五章 总结

参考文献

附录

致谢

个人简历和发表的学术论文