温莪术中β-榄香烯的分离鉴定及抑制肿瘤细胞增殖作用研究

摘要

目的:利用CO2超临界流体萃取技术结合柱层析方法从温莪术中提取分离β-榄香烯,为β-榄香烯的制剂研究提供基础。方法与结果:利用CO2超临界流体萃取技术提取温莪术中的挥发油,通过正交试验,以β-榄香烯的得率为指标,结果最佳萃取条件为:萃取压力30MPa、萃取温度40℃、CO2流量24L/h、萃取时间90 min。以200-300目的柱层析硅胶装柱,30-60℃石油醚洗脱,分离出β-榄香烯,并用质谱、红外色谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱等方法进行鉴定。MTT法分别做了不同浓度β-榄香烯对人喉鳞癌Hep-2细胞、人胰腺癌细胞、乳腺癌MCF-7/S细胞、白血病Raji细胞增殖作用的实验,结果β-榄香烯对四种癌细胞增殖都有抑制作用,并随浓度增大抑制作用增强。结论:CO2超临界流体萃取技术结合柱层析方法可获得高纯度的β-榄香烯,工艺方法切实可行,稳定可靠,体外抑制癌细胞增殖实验为β-榄香烯制剂研究提供了理论基础。

目录

提要

Abstract

引言

第一部分 选题依据

1 研究的目的与意义

2 温莪术的研究概述

2.1 来源及功效

2.2 有效成分

3 β-榄香烯的研究进展

3.1 化学成分

3.2 药代动力学

3.3 药理作用

3.4. 临床应用

4 CO_2超临界流体萃取技术简介

4.1 原理

4.2 优点

第二部分 CO_2超临界萃取β-榄香烯的工艺研究

1 仪器与材料

2 方法与结果

2.1 CO_2超临界萃取实验方法

2.2 CO_2超临界萃取工艺的优选

2.3 β-榄香烯含量测定方法

2.4 验证试验

2.5 讨论

第三部分 β-榄香烯的分离及鉴定

1 层析法简介

1.1 层析法分类

1.2 柱层析

2 提取分离步骤

2.1 仪器与材料

2.2 层析装置

2.3 样品胶的制备

2.4 装柱

2.5 胶柱的洗脱

2.6 薄层层析检测

2.7 样品的收集

2.8 纯度测定

3 鉴定

3.1 仪器与试剂

3.2 色谱条件和质谱条件

3.3 结果

4 讨论

第四部分 β-榄香烯对癌细胞增殖作用的实验研究

1 仪器

2 试剂

3 溶液的配制

3.1 RPMI-1640培养基

3.2 PBS

3.3 胰蛋白酶(1:250)

3.4 胎牛血清灭活

3.5 MTT储存液

3.6 抗储存液

4 实验方法

4.1 细胞传代培养

4.2 MTT法检测β-榄香烯对细胞的增殖作用

5 实验结果

6 讨论

结语

参考文献

发表论文

致谢