“劳倦过度、房室不节”致肾阳虚及补肾阳对小鼠甲状腺轴及睾丸基因表达谱的影响

摘要

目的:探讨“劳倦过度、房室不节”致肾阳虚小鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴的神经内分泌、病理形态学、凋亡相关基因表达的变化,以及下丘脑-垂体-性腺轴的睾丸基因表达谱的改变,同时,研究金匮肾气丸对肾阳虚小鼠甲状腺轴及性腺轴影响的部分作用机理。
　　方法:建立“劳倦过度、房室不节”肾阳虚小鼠模型。采用光镜、电镜、放射免疫分析、免疫组织化学分析、基因芯片技术等方法,对正常、肾阳虚、补肾阳三种小鼠进行甲状腺的组织形态学及超微结构观察、血清甲状腺轴激素TSH、T3、T4含量测定、甲状腺组织凋亡相关基因Fas、FasL、Bcl-2、Bax和Caspase-3表达检测,并绘制睾丸组织基因表达谱比较的散点图,对睾丸组织基因芯片差异表达基因进行筛选和分析。
　　结果:1.通过对小鼠体温、体重及一般状况的观察,表明“劳倦过度、房室不节”肾阳虚小鼠模型复制成功;2.肾阳虚小鼠存在甲状腺病理形态学的损伤,金匮肾气丸可以改善肾阳虚小鼠甲状腺组织形态及超微结构发生的损伤;3.肾阳虚小鼠存在甲状腺轴激素水平下降,金匮肾气丸治疗后可上调肾阳虚小鼠血清甲状腺轴激素水平;4.肾阳虚小鼠可能存在甲状腺组织促凋亡基因Bax表达增加,金匮肾气丸可使肾阳虚小鼠甲状腺组织FasL、Bax蛋白表达明显下降;5.绘制了模型组/对照组、治疗组/模型组基因表达谱比较的散点图,筛选出差异表达基因,模型组/对照组上调2425个,下调3080个,治疗组/模型组上调99个,下调96个。模型组/对照组上调而治疗组/模型组下调的基因10个,模型组/对照组下调而治疗组/模型组上调的基因15个,均主要与细胞结构/功能、物质/能量代谢、信号转导/传递、转录/翻译、增殖/分化、细胞周期、细胞凋亡等有关。并探讨了金匮肾气丸使模型组小鼠下调的睾丸基因Usp39、Jam2、Cdc20上调、上调的睾丸基因Argl、Akap10下调的作用机制。
　　结论:“劳倦过度、房室不节”肾阳虚小鼠甲状腺轴激素含量下降,甲状腺组织形态及超微结构损伤,甲状腺促凋亡基因Bax表达增加,睾丸组织中与细胞周期、能量代谢及精子发生相关的基因表达谱改变,导致小鼠甲状腺轴及性腺轴功能低下。金匱肾气丸可以提高肾阳虚小鼠甲状腺轴激素含量,改善甲状腺的组织形态及超微结构,并可通过降低FasL、Bax的表达水平,抑制甲状腺细胞凋亡,促进甲状腺轴功能恢复,还可以调节与细胞周期及精子发生等相关睾丸基因的表达,促进性腺轴功能恢复。

目录

提要

Abstract

引言

实验研究

实验一 "劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠模型的复制

一、材料与方法

二、结果

实验二 小鼠甲状腺组织学观察

一、材料与方法

二、结果

实验三 小鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴激素含量的测定

一、材料与方法

二、结果

实验四 小鼠甲状腺组织Fas、FasL、Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达

一、材料与方法

二、结果

实验五 小鼠睾丸组织基因表达谱的变化

一、材料与方法

二、结果

讨论

一、中医对"肾阳虚证"的认识

(一) 中医对"肾"及"肾阳"的认识

(二) 中医对肾阳虚证的认识

二、肾阳虚证下丘脑-垂体-甲状腺轴的现代研究

(一) 肾阳虚证动物模型甲状腺轴实验研究现状

(二) 临床肾阳虚证甲状腺轴的研究现状

(三) 思考与质疑

三、肾阳虚证基因表达谱研究

(一) 肾阳虚证动物模型的基因芯片研究

(二) 临床肾阳虚证的基因芯片研究

(三) 思考与质疑

四、"劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠模型的选择

(一) 甲状腺功能受抑制肾阳虚证动物模型

(二) "劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠模型的选择

五、金匮肾气丸的组方及现代研究

(一) 金匮肾气丸的功效及方义

(二) 金匮肾气丸成方的现代研究

六、金匮肾气丸对肾阳虚小鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴的神经内分泌影响

七、金匮肾气丸对肾阳虚小鼠甲状腺组织凋亡相关基因表达的影响

八、肾阳虚证下丘脑-垂体-性腺轴及"肾主生殖"的前期研究

(一) "劳倦过度、房室不节"致肾阳虚及补肾治疗对小鼠生精功能的影响

(二) "劳倦过度、房室不节"致肾阳虚及补肾治疗对小鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响

(三) "劳倦过度、房室不节"致肾阳虚及补肾治疗对小鼠睾丸组织端粒酶活性的影响

九、金匮肾气丸对肾阳虚小鼠睾丸基因表达谱的影响

(一) 模型组小鼠的基因改变

(二) 治疗组小鼠的基因改变

(三) 金匮肾气丸的治疗作用

十、本研究的创新点及下一步的设想

(一) 本研究的创新点

(二) 下一步的设想

结语

参考文献

附录

致谢