免疫球蛋白重链结合蛋白在人骨肉瘤细胞中的表达及临床意义

摘要

目的:应用不同的实验方法来检测免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)在人骨肉瘤细胞株Saos2细胞中的表达,并进一步研究其在临床20例骨肉瘤标本及其周围正常组织中的表达;并比较骨肉瘤组织及正常组织表达的差异;术前化疗与术前未化疗标本表达的差异;远隔转移及未转移标本之间的表达差异。并依此来推断这Bip在骨肉瘤组织中的表达与骨肉瘤生长、转移的关系以及化疗对其表达的影响,以期能为骨肉瘤治疗和预后评估提供实验和理论依据。
　　方法:1、取人骨肉瘤细胞株Saos2细胞进行免疫荧光染色。以空白组作为对照。用荧光显微镜观察是否有Bip蛋白质表达。
　　2、取人骨肉瘤细胞株Saos2细胞抽提细胞总RNA,然后用RT-PCR试剂盒进行PCR反应。检测是否有BipmRNA的表达。
　　3、取临床骨肉瘤及其周围正常组织标本各20例,骨肉瘤标本中未转移者6例,转移者14例;术前化疗者12例,术前未化疗者8例。做石蜡切片进行免疫荧光染色。检测Bip表达强度。
　　结果:1、Bip在人骨肉瘤细胞株Saos2细胞中有表达,主要存在于细胞内质网膜上,细胞胞浆被染为绿色为阳性。染色深时为全胞浆绿色,浅时为类泡样胞浆绿染。
　　2、BipmRNA在人骨肉瘤细胞株Saos2细胞中有表达。
　　3、所有标本中都有Bip的表达。Bip的表达强度为肿瘤组织＞正常组织,肿瘤转移组＞未转移组,术前未化疗组＞术前化疗组。肿瘤转移组和未转移组,术前未化疗组和术前化疗组表达量有显著差异。
　　结论:本研究表明,Bip可刺激肿瘤增殖,存活,转移,并且对化疗药物治疗有相应的反应。因此,Bip可作为骨肉瘤生长转移和治疗反应的分子靶向标记,在临床工作中也可应用Bip作为判断骨肉瘤发展和预后的生物标记。而应用基因手段下调Bip的表达可能抑制骨肉瘤细胞的生长、增加骨肉瘤细胞对化疗药物的敏感性,控制其转移并改善预后。抑制Bip表达的联合治疗可能代表根除残留骨肉瘤的新方法。因此,利用Bip作为分子靶点或介质进行骨肉瘤基因治疗具有广泛的应用前景。

目录

提要

Abstract

引言

材料和方法

1 实验材料

1.1 细胞株和标本

1.2 主要试剂材料

1.3 主要试剂的配制

2 主要仪器设备

3 实验方法

3.1 细胞培养

3.2 细胞爬片

3.3 细胞收集

3.4 免疫细胞化学

3.5 RT-PCR

3.6 免疫组织化学

3.7 数据分析

实验结果

1 免疫细胞化学荧光染色检测BIP表达结果

2 RT-PCR法检测BIP表达结果

3 免疫组织化学荧光染色检测BIP表达结果

讨论

1 骨肉瘤治疗的发展及缺陷

2 BIP的结构及功能

3 BIP在肿瘤中的诱导与肿瘤生长、转移、耐药的关系

4 BIP在肿瘤治疗中的应用前景

结语

参考文献

附录

1 附图

2 符号说明

综述

参考文献

致谢