PMS肝气逆证大鼠脑区ERα和ERβ基因表达及药物的影响

摘要

目的:制备经前期综合征(premenstrual syndrome, PMS)肝气逆证大鼠模型;检测大鼠中枢不同脑区(下丘脑、边缘叶、额叶皮层和海马)ERα和ERβ基因表达的变化和ERβ/ERα与经前期综合征(PMS)肝气逆及行为学变化的关系;探讨PMS肝气逆证发病的微观机制及中药复方制剂经前平颗粒的干预作用。方法:采用电笼刺激法制备PMS肝气逆证大鼠模型,以调肝方药经前平颗粒进行药物干预。采用细胞涂片法观察大鼠阴道细胞形态,确定动情周期:接收期与非接收期。旷场实验检测大鼠行为学变化。提取脑组织RNA和蛋白质,采用半定量RT-PCR法测定各ERα和ERβmRNA水平变化,采用蛋白质印迹技术(western blot, WB)法检测各脑区ERα与ERβ蛋白质水平变化。结果:与正常对照组大鼠相比,模型组大鼠旷场实验的水平得分、垂直得分及总分均显著减少;与模型组相比,给药组大鼠旷场水平得分、垂直得分及总分均显著增加。利用RT-PCR方法研究显示,与正常对照组大鼠相比,模型组大鼠下丘脑、边缘叶、皮层和海马组织ERα和ERβmRNA表达显著降低(P＜0.05),调肝方药经前平颗粒干预可改变ERα和ERβmRNA表达水平降低的状态。蛋白印迹实验表明,与正常对照组大鼠相比,模型组大鼠额叶皮层、海马、下丘脑、边缘叶ERα和ERβ表达显著降低(P＜0.01);与模型组比较,给药组各脑区的ERα和ERβ表达水平不同程度的升高。结论:PMS肝气逆证模型大鼠四个脑区ERα和ERβ基因表达降低,提示PMS肝气逆证的发生可能与中枢ERα和ERβmRNA表达降低相关;中药经前平颗粒对该病证模型大鼠上述脑组织内ERα和ERβ基因表达量的调节,可能是该药治疗PMS肝气逆证的机制之一。

目录

提要

Abstract

引言

材料与方法

1 实验材料

1.1 药品与试剂

1.2 实验仪器

1.3 实验动物

1.4 溶液配制

2 方法

2.1 PMS肝气逆证大鼠模型制备

2.2 雌激素受体基因表达的检测

结果

1 行为学测试结果

2 中枢雌激素受体基因表达检测结果

2.1 中枢雌激素受体mRNA水平测定结果

2.2 中枢雌激素受体蛋白质水平测定结果

讨论

1. PMS肝气逆证动物模型和动情期的选择及行为学改变

1.1 动情周期的选择

1.2 PMS肝气逆模型的制备及模型评价方法

1.3 实验中中枢脑区的选择

2. 雌激素受体基因表达的改变及其与PMS肝气逆证的关系

2.1 雌激素受体两个亚型

2.2 雌激素受体对5-HT影响

2.3 ER与γ-氨基丁酸的关系

问题与展望

参考文献

综述

参考文献

附录

致谢