硫化氢对氧应激下大鼠肝星状细胞MAPK信号通路影响的研究

摘要

目的：肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）的增殖与激活作为肝纤维化发生发展的主要环节之一，各种不同的因素激活HSC，并使细胞外基质大量的形成并沉积后，导致肝纤维化的发生。所以降低自我放大效应和活化后机体损伤是治疗肝纤维化的重点。硫化氢（hydrogen sulfide，H2S）作为一种气体信号分子是近年来发现的，在循环系统、神经系统疾病的发生中具有重要的作用，具有多种生理功能。为了研究H2S与肝纤维化之间所存在的关系，利用铁超载的方法建立氧应激模型，在体外复制肝纤维化，给予H2S的供体硫氢化钠（sodium hydrosulfide，NaHS）和内源性H2S作用的KATP通道阻滞剂格列苯脲（glibenclamide，GLBN），通过检测硫化氢对氧应激下大鼠肝星状细胞（HSC-T6）MAPK信号通路影响，验证氧应激下硫化氢对HSC细胞具有保护作用的假说。
　　方法：将大鼠肝星状细胞分为6组：空白组（B组，HSC-T6）；氧化应激模型组(C组，B组+500μmol/L Fe-NTA)；N1组(C组+100μmol/L NaHS)；N2组（C组+200μmol/L NaSH）；N3组（C组+400μmol/L NaHS）；格列苯脲组（GLBN组，C组＋200μmol/L）。用铁超载的方法复制HSC氧化应激模型，RT-PCR和Western Blot检测p38、p-p38、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK在24h和48h时的mRNA和蛋白质水平变化。
　　结果：在氧应激模型下，给予FeNTA24和48h时以后，模型组p38、ERK和JNK mRNA水平与空白组比较均升高明显(P<0.05)。给予100、200、400μmol/L NaHS处理后三组的p38 mRNA水平和C组比较，表达逐渐降低，差异显著(P<0.05)，三个不同浓度的组间相比较差异显著(P<0.05)。GLBN组的p38 mRNA表达水平有所上升，差异显著(P<0.05)。然而，ERK和JNK mRNA水平在给予不同浓度NaHS处理的N1组、N2组、N3组的ERK和JNK mRNA水平和模型组比较时，无明显变化，差异无统计学意义(P>0.05)，三组不同浓度间的组间差异均无统计学意义(P>0.05)。加入格列苯脲后，ERK和JNKmRNA表达水平无明显变化。
　　在蛋白质水平，p-p38、p-ERK、p-JNK模型组与空白组比较均升高明显(P<0.05)。给予100、200、400μmol/LNaHS处理后三组的p-p38蛋白质表达水平和C组比较，逐渐降低，差异有统计学意义(P<0.05)，经上述不同浓度NaHS处理后的三个组间相比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。GLBN组，p38蛋白质表达水平有所上升，但低于C组。然而，模型组（p38、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK）蛋白质水平与空白组相比较无明显变化(P>0.05)。给予100、200、400μmol/L NaHS处理后三组的p38、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK蛋白质水平和模型组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，并且经上述不同浓度NaHS处理后的三个组间相比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。加入格列苯脲后，在蛋白质表达水平，ERK、JNK、p-ERK、p-JNK无明显变化。
　　结论：硫化氢对氧应激下大鼠肝星状细胞（HSC-T6）的MAPK信号通路的影响是通过抑制p38实现的。

目录

封面

目录

中文摘要

英文摘要

前 言

第一章 材料与方法

1.1实验材料

1.2方法

1.3统计学方法

第二章 实验结果

2.1 RT-PCR法测定p38、ERK、JNK基因表达水平

2.2 Western Blot 法测定p38、p-p38、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK蛋白表达水平

第三章 讨 论

第四章 结 论

参考文献

附 录

实验路线图

综 述

1 HSC的激活

2 肝星状细胞激活相关主要信号转导通路

3 展望

致谢

攻读学位期间取得的研究成果

学位论文独创性声明

学位论文知识产权权属声明