番茄线粒体小分子热激蛋白基因启动子的分子克隆

摘要

该研究工作主要包括以下三个部分:第一部分:用番茄MT sHSP cDNA(LeHSP23.8)内部特异引物gMT/F、gMT/R,对番茄(Lycopersicon esc μ llentum)中疏四号基因组DNA进行PCR扩增,产物连入T载体测序,发现基因内部有245bp内含子.第二部分:用位于番茄MT sHSP cDNA下游的单一酶切位点EcoR Ⅰ,与能克隆入pBS Ⅱ(KS+)的8种酶(BamHⅠ、Bgl Ⅱ、Kpn Ⅰ、Pst Ⅰ、Sac Ⅰ、Spe Ⅰ、Xba Ⅰ、Xho Ⅰ)分别双酶切番茄

目录

独创声明

一、文献综述

(一)启动子

1.启动子定义

2.启动子分类

3.启动子克隆意义

4.启动子克隆的策略

(二)热激蛋白基因表达的调控

1.热休克元件的调控作用

2.热激因子的调控作用

3.热休克基因的诱导表达及其转录后调控

二、材料与方法

1、实验材料

2、实验方法

2.1番茄基因组DNA的提取(CTAB法)

2.2 PCR产物与T-载体的连接

2.3大肠杆菌感受态细胞的制备及转化

2.4质粒的提取

2.5 PCR验证重组子

2.6序列测定

2.7基因组DNA的Southern杂交

2.8构建质粒文库

2.9番茄线粒体小分子热激蛋白启动子的分析

三、实验结果

1.MT sHSP基因内含子的获得

2.Southern杂交结果

3.预测MT sHSP基因上游调控序列的物理图谱

4.质粒文库的构建

5.MT sHSP基因启动子片段的获得

6.植物表达载体的构建

7.番茄的遗传转化及再生

8.GUS组织化学染色

四、讨论

参考文献

附图

附录

致谢