鲤鱼（Cyprinus carpio L.）肠粘液细胞对血清IgM转运机制的初步研究

摘要

本研究以我国常见的鲤鱼(CyprinuscarpioL.)为材料，首先纯化鲤鱼血清IgM，然后利用纯化的鲤鱼血清IgM制备亲和层析柱，获得鲤鱼肠上皮细胞膜IgM受体分子(简称fpIgR)，再以fpIgR为抗原制备豚鼠抗血清(简称Anti-fpIgR)，利用免疫荧光标记技术对该IgM受体分子的分布进行观察和分析。　　采用SephadexG-200凝胶层析和MBP亲和层析方法分离纯化鲤鱼血清IgM，分子量约885kDa。利用SDS-PAGE和HPLC对其进行初步分析，结果表明，血清IgM可以解离形成重链和轻链，分子量分别是82kDa和29kDa。　　利用凝胶层析纯化的鲤鱼血清IgM制备亲和层析柱，获得了鲤鱼肠上皮细胞膜IgM受体fpIgR，SDS-PAGE和HPLC检测结果表明，该受体分子的分子量为43kDa，HPLC检测呈现一个主峰。将纯化的fpIgR与血清IgM过夜孵育后再进行HPLC检测，结果表明，纯化的肠上皮细胞膜IgM受体fpIgR仍具有与血清IgM结合的能力。　　利用不同的荧光标记物对鲤鱼肠组织和脾脏淋巴细胞进行免疫荧光标记。　　综上所述，纯化得到的IgM受体分子fpIgR只存在于鲤鱼肠上皮细胞，不同于脾脏淋巴细胞表面的IgM受体分子。　　本研究通过亲和层析方法获得的鲤鱼肠上皮细胞膜IgM受体分子在鲤鱼的粘液性免疫球蛋白转运中可能起着关键作用，对其展开深入研究对了解鱼类粘液性免疫球蛋白的来源和粘液免疫机制具有重要的意义。

目录

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综述：免疫球蛋白转运机制的研究

一鱼类免疫球蛋白的研究

二免疫球蛋白转运的研究

1前言

2材料与方法

2.1材料

2.1.1实验动物

2.1.2主要实验仪器

2.1.3蛋白纯化常用试剂及试剂盒

2.1.4膜受体纯化常用试剂

2.1.5电泳常用试剂

2.1.6免疫组化常用试剂

2.2方法

2.2.1鲤鱼血清IgM的提取纯化

2.2.2鲤鱼肠上皮细胞膜IgM受体的亲和纯化

2.2.3鲤鱼肠组织及脾脏细胞的免疫荧光标记

3结果

3.1鲤鱼血清IGM的纯化和检测

3.1.1凝胶层析纯化鲤鱼血清IgM及检测

3.1.2MBP亲和纯化鲤鱼血清IgM及检测

3.2鲤鱼肠上皮细胞膜IGM受体分子的纯化和检测

3.2.1鲤鱼肠上皮细胞膜全蛋白的检测

3.2.2鲤鱼肠上皮细胞膜IgM受体的纯化及检测

3.2.3鲤鱼肠上皮细胞膜IgM受体的HPLC检测

3.3鲤鱼肠组织及脾脏细胞的免疫荧光标记

3.3.1鲤鱼肠组织的H.E.染色

3.3.2鲤鱼肠组织的AB-PAS染色

3.3.3鲤鱼肠组织的FITC-IgM荧光标记

3.3.4鲤鱼肠组织的Anti-fpIgR间接荧光标记

3.3.5鲤鱼肠组织经Anti-fpIgR封闭后的FITC-IgM荧光标记

3.3.6鲤鱼脾脏细胞的FITC-IgM荧光标记

3.3.7鲤鱼脾脏细胞的Anti-fpIgR间接荧光标记

4讨论

5结论

6参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表文章