山东半岛地区不同来源的禽Ⅰ型副粘病毒毒力差异比较研究

摘要

本论文对山东半岛地区的4株禽Ⅰ型副粘病毒强毒株进行了分离，对其血清学、临床毒力表现和分子生物学方面进行了研究。 将4株地方强毒株经绒毛尿囊腔接种10日龄鸡胚，鸡胚接种后36—72h鸡胚全身出血，含病毒的尿囊液红细胞凝集效价（HA）为1：160-1：640，并且能被ND标准阳性血清所抑制，不能被AI标准阳性血清所抑制。人工发病实验结果表明3株鸡源禽Ⅰ型副粘病毒属于强毒株，鸽源禽Ⅰ型副粘病毒对鸡不发病，对鸽则表现为强毒株。 为了探讨山东半岛地区NDV毒力分布情况，将分离获得的其中3株NDV的鸡胚平均致死时间（Mean death time，MDT）、1日龄雏鸡脑内致病指数（Intracerebral pathogenicity index，ICPI）和6周龄鸡静脉内致病指数（Intravenous pathogenicity index，IVPI）进行测定。NDV—PL（蓬莱）株、NDV—ZY（招远）株、NDV—LZ（莱州）株的MDT分别为63.23、60、61.5，ICPI分别为0.9、1.83、1.5，IVPI分别为2.35、2.74、2.61，结果表明3株NDV中，NDV—LZ株的各项指标均为强毒力病毒，NDV—ZY株和NDV—PL株除ICPI结果显示为中等毒力病毒外，其余结果均显示为强毒力病毒，表明这3株新城疫病毒毒株对鸡有较强的致病力。 利用自己设计的引物和参考已发表的引物，通过一步法RT—PCR扩增出三个毒株的479bp的片段和两个毒株的497bp的片段，这两个目的片段含有F蛋白的酶切裂解位点。将目的片段在72℃加腺苷酸尾后，克隆至pGEM—T Easy载体中，构建了相应的重组质粒，经酶切与PCR鉴定后，送交测序并贮存基因。4株cDNA测序结果表明，各毒株的酶切裂解位点都符合强毒株的酶切裂解位点的序列，表明我们所分离的毒株都属于强毒株。 针对F基因479bp和497bp片段，通过DNASIS软件构建了相应的系统发育树，系统发育分析表明山东半岛地区禽Ⅰ型副粘病毒与欧美及中东地区基因群明显分离，但鸽瘟病毒与东北地区禽Ⅰ型副粘病毒的同源性很高。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：本文常用缩写词及英汉对照表

声明

前 言

第一章禽Ⅰ型副粘病毒毒株分离和血清学特性的初步确定

1.前言

2.材料与方法

2.1材料

2.2方法

3.结果

3.1病毒的收获及胚体病变

3.2病毒的血清学特性研究

4.讨论

4.1病毒的分离与繁殖

4.2 NDV-PL、NDV-LZ、NDV-ZY、、PPMV-Ⅰ株实验感染鸡、鸽的观察结果比较

5结论

第二章三株新城疫病毒毒力测定

1前言

2材料和方法

2.1 病毒

2.2实验动物

2.3毒株的鸡胚传代

2.4致死鸡胚平均死亡时间(MDT)和最小致死量(MLD)的测定

2.5对1日龄易感雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)的测定

2.6对6周龄非免疫雏鸡静脉接种致病指数(IVPI)的测定

3结果

3.1致死鸡胚平均死亡时间(MDT)和MLD测定的结果

3.2 1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)测定的结果

3.3 6周龄非免疫雏鸡静脉接种致病指数(IVPI)测定的结果

4讨论

5结论

第三章禽Ⅰ型副粘病毒毒株的F基因的克隆与分析

1前言

2材料与方法

2.1材料

2.2方法

3重组质粒的鉴定

3.1 电泳初步鉴定

3.2重组质粒的酶切鉴定

3.3重组质粒的PCR鉴定

3.4 cDNA序列的测定

3.5联机检索进行blast分析

3.6测序结果分析

3.7 F基因系统发育树的建立

4结果

4.1引物设计

4.2 F基因的RT-PCR扩增

5 讨论

5.1 PCR引物设计的原则

5.2 RT-PCR扩增

5.3回收目的DNA片段时须知

5.4 EB在电泳前或电泳后加入琼脂糖的优点与缺点

5.5 目的片段的克隆

5.6质粒提取过程中的注意事项

5.7重组质粒的酶切

6结论

参考文献

学位期间发表的学术论文

致 谢