蛋白质寡核苷酸适配体的筛选与应用研究

摘要

本工作探讨了盐离子种类及浓度对适配体与凝血酶结合的影响，并在选定的电泳条件下对凝血酶检测的线性范围、检出限和重现性进行了测定。结果表明，盐离子存在的条件下适配体与凝血酶的亲和力降低，不利于两者的结合；人血清溶液中，凝血酶浓度在0.25-10 nmol/L范围内与复合物峰面积具有良好的线性相关性(Y=1.2×105X+5.33×104，r2= 0.991)，最低检出限为55.6pmol/L；精密度试验和回收率试验结果均满足分析要求。 适配体与各种配体的结合是基于单链核酸结构和空间构象的多样性。在靶分子存在的条件下，它可通过链内某些互补碱基间的配对以及静电作用、氢键作用等自身发生适应性折叠形成发卡(hairpin)、假结(pseudoknot)、凸环(stem loop)、G2四分体(G2quartet)等稳定的三维空间结构。核苷酸与配体间有较大的接触面积，能形成许多潜在的结合位点，这一优势使适体能识别配体间一个基团的细微差别。经过SELEX技术反复筛选的适配体能与靶分子以极高的亲和力和特异性相结。核酸适体与靶物质亲和力极高，kd值多在pmol/L～nmol/L之间。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词

声明

论文综述 第一章适配体综述

第一节适配体的筛选

1适配体筛选过程

2筛选方法

第二节适配体的应用

1目标分子的分离、纯化和检测

2芯片技术

3蛋白质组学的研究

4生物传感器

5放大检测

6毛细管电泳分离检测

7新药研发

总结与展望

实验研究部分 第二章蛋白质寡核苷酸适配体的筛选技术平台搭建

第一节卵黄蛋白原提取纯化

1试验试剂和仪器

2试验方法

3试验结果

第二节卵黄蛋白原等五种蛋白适配体筛选方法的建立

1试验材料

2试验方法

3实验结果

4实验小结

实验研究部分 第三章适配体亲和毛细管电泳-激光诱导荧光检测人凝血酶

1实验材料与仪器

2实验方法

3实验结果

4实验小结

试验总结论

参考文献

致谢

硕士期间发表的论文