济南地区不同水体中环境激素含量测定及生物学效应研究

摘要

环境激素类物质广泛存在于我们生存的环境中，对人类和其他生物的生存造成严重威胁。本研究首先采用重组基因酵母的方法初步检测济南地区不同水体(包括污水(污水处理厂进水，厌氧池，生物反应池，1A级出水，2级出水)；医院出水(省中医，妇幼保健院)；其他水样(黄冈上，黄冈下，玉清湖，东平干渠，睦里庄，彭庄))中雌激素总体含量。由于重组基因酵母的方法灵敏性不高，重复性不好，进而采用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)的方法测定这些水体中5种代表性雌激素的含量(雌酮(E1)，雌二醇(E2)，雌三醇(E3)，乙炔基雌二醇(EE2)，己烯雌酚(DES))。通过之前雌激素含量测定的结果得知污水处理厂所采水样中仍残留较高浓度的环境激素，进而选用斑马鱼作为实验对象进行生物学效应研究，采用real-time PCR的方法研究不同浓度雌酮及污水对成年雄性斑马鱼内分泌相关基因表达变化情况的影响(vtg，esr)。具体实验结果如下:
　　首先采用重组基因酵母法检测所采全部水样中雌激素总体含量。在所有水样中，能检测到雌激素活性的有妇幼保健院和省中医出水，河流湖泊及排污口上下游水样均未检测出雌激素活性，而污水处理厂水样中厌氧池，生物反应池，1A级出水，2级出水未检出，但污水处理厂进水水样中毒性太高，导致酵母死亡，无法测定其雌激素含量。
　　由于重组基因酵母法灵敏度低，重复性差，进而采用高效液相色谱-质谱联用的方法(HPLC-MS法)检测水体中5种雌激素含量(雌酮(E1)，雌二醇(E2)，雌三醇(E3)，乙炔基雌二醇(EE2)，己烯雌酚(DES))，污水处理厂按处理流程各级水样中5种雌激素含量基本不发生变化，雌酮含量较高(约10ng/L)。医院出水(妇幼保健院，省中医)中各种雌激素含量也很高(尤其是雌二醇，雌酮，己烯雌酚)，远高于其他河流及污水处理厂水样。污水处理厂排污口上游和下游中雌激素残留也较高(雌酮含量约10ng/L)。
　　在检测了所采水样中雌激素含量之后，初步明确环境水样中雌激素污染程度，在此基础上进而研究其生物学效应，从而探讨环境雌激素对实验动物乃至对人类可能造成的危害。雌酮作为标准对照，首先研究成年雄性斑马鱼在雌酮中的内分泌干扰效应，采用real-time PCR的方法研究雌酮对斑马鱼肝脏中vtg及esr基因表达变化情况的影响。然后将成年雄性斑马鱼分别在污水处理厂进水，2级出水，1A级出水水样中暴露15天进行real-time PCR研究污水对斑马鱼肝脏中vtg及esr基因表达变化情况的影响。污水处理厂所取水样均能使雄鱼vtg表达水平升高，而且都是5天时达到最高，然后下降；esr基因也是先上升后下降的趋势，其中1A级出水和进水组都是5天时表达量最高，而2级出水组10天时基因表达量最高然后下降。

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综述

1 环境激素概述

2 环境激素检测方法及相关研究进展

3 本课题研究相关内容

4 本课题研究意义

第一章 环境水样中类雌激素总体效应的测定

1.1 前言

1.2 实验材料

1.3 实验方法

1.4 实验结果

1.5 讨论

第二章 环境水样中 5 种雌激素含量的测定

2.1 前言

2.2 实验材料

2.3 实验方法

2.4 实验结果

2.5 讨论

第三章 雌酮对于斑马鱼内分泌干扰效应的研究

3.1 前言

3.2 实验材料

3.3 实验方法

3.4 实验结果

3.5 讨论

第四章 污水处理厂水样对斑马鱼内分泌干扰效应的研究

4.1 前言

4.2 实验材料

4.3 实验方法

4.4 实验结果

4.5 讨论

结论

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表文章