马铃薯增强子捕获系群体的创建和分析

摘要

马铃薯作为世界上第四大粮食作物，同时也是中国的第四大粮食作物，在人民生活中占着越来越重要的地位。马铃薯全基因组测序的完成，帮助人们加深对马铃薯遗传规律的了解，加强对其丰富的遗传资源的开发，同时也加快分子育种的运用。双单倍体马铃薯DM（DM13-516-R44）为测序材料之一，本研究以它为材料，通过农杆菌介导将构建好的增强子捕获T-DNA载体导入马铃薯的外植体中，获得转基因植株，得到转基因植株后，利用潮霉素设计引物对生根较好的转化苗进行PCR鉴定，初步构建了马铃薯增强子捕获系群体。此外，利用PCR-walking技术扩增了突变体植株的侧翼序列，并结合已经公布的马铃薯序列对部分侧翼序列进行了分析。主要的研究结果如下：
　　1.初步建立了马铃薯增强子捕获系群体，获得了12000株左右的转化苗，对1500株转化苗进行阳性鉴定，有978个阳性株系。同时，优化了马铃薯DM的转化体系，主要的实验条件为：诱导分化培养基中头孢霉素（cef）的浓度为600mg/L、潮霉素（hyg）为8mg/L，外植体预培养13天、侵染时间8min、农杆菌浓度OD600=0.4、共培养3天。
　　2.利用PCR-walking技术扩增了马铃薯突变体的侧翼序列，对60个阳性突变体进行了扩增，其中28个突变体扩增出单一条带并测序，其测序结果与马铃薯全基因组序列比对后，发现有6个突变体是有效插入，对插入位点的信息做了初步分析。
　　3.将鉴定过的30个阳性突变体植株种植于温室，获得了30个突变体植株的微型种薯，观察到部分突变体的表型变化。将460个已鉴定的阳性突变体植株种植，观察其表型变化。

目录

声明

主要符号对照表

第一章 文献综述

1.1 研究背景

1.2马铃薯基因组学研究概述

1.3 T-DNA插入突变技术在植物基因组学中的应用

1.4 插入片段侧翼序列的分析

1.5本研究目的意义和技术路线

第二章 马铃薯增强子捕获系群体的初步建立

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3实验结果

2.4讨论

第三章 转基因植株的获得及鉴定

3.1 实验材料

3.2 实验方法

3.3 实验结果

3.4讨论

第四章 突变体植株的初步分析和侧翼序列的扩增

4.1突变体植株的初步分析

4.2突变体植株侧翼序列的扩增

第五章 结论及创新点

参考文献

作者简历

致谢