硫化氢对烧伤大鼠体外培养皮肤巨噬细胞MAPK信号通路中p-ERK、p-p38、p-JNK的影响

摘要

目的:通过建立烧伤模型（大鼠），提取烧伤后皮肤基底的巨噬细胞，加入外源性H2S，用免疫印迹（Western blotting, WB）法测定体外培养巨噬细胞中的p-ERK、p-p38、p-JNK的蛋白含量的变化，探究硫化氢对体外培养皮肤巨噬细胞p-ERK、p-p38、p-JNK的影响，探究H2S参与创面愈合的一些机制。
　　方法:本实验的研究对象是烧伤大鼠创面皮肤基底提取的巨噬细胞。在30只大鼠中选取5只,正常饲养；其余25只做烫伤处理，从5只正常大鼠中随机选取1只大鼠作为正常组，25只烧伤大鼠中随机选取12只分为烧伤组、格列本脲（GLBN）组、NaHS+GLBN和NaHS组，每组3只大鼠。其中烧伤组和正常组加入等量PBS，格列本脲组加入格列本脲（调整终浓度至200umol/L），分别作用1、6、12小时。NaHS组加入NaHS（调整终浓度至200umol/L）,分别作用1、6、12小时。NaHS+GLBN组加入NaHS+GLBN（二者调整终浓度均为200umol/L）,作用1小时、6小时、12小时。在达到作用时间后通过免疫印迹法分别测定巨噬细胞细胞中p-PERK、p-p38、p-JNK的蛋白含量。
　　结果:(1)p-ERK蛋白相对表达量比较（P＜0.05）：①烧伤组与空白对照组p-ERK量做相应检验，分析结果有意义。②在同一时间，NaHS组与各组别 p-ERK相对量进行相应分析，认为分析结果有意义。③NaHS+GLBN组与GLBN组p-ERK蛋白量进行相应分析，结果有一定的差别，有统计意义。④GLBN组与烧伤组p-ERK蛋白相对量进行相应分析，分析所得到的结果有意义。(2)p-JNK蛋白相对表达量比较（P＜0.05）：各组间比较：①烧伤组和空白组p-JNK蛋白表达量进行对比，结果经相应方法检验后，得出两组结果有差异，其结果有意义。②在同一时相点，NaHS组与其他组p-JNK表达量之间进行相应统计检验，结果有意义。③NaHS+GLBN组与GLBN组p-JNK蛋白表达量结果比较，有统计学意义。④GLBN组与烧伤组 p-JNK蛋白量之间进行相应检验，得出的结果有差异。(3)p-p38蛋白表达量之间比较（P＜0.05）：①烧伤组与空白对照组 p-p38相对表达量经过相应的检验后，认为结果有一定的意义。②同一时间比较，NaHS组和其他各组别 p-p38蛋白相对量经比较后认为差别之间比较有意义。③NaHS+GLBN组与GLBN组 p-p38蛋白表达量结果比较有统计意义。④GLBN组与烧伤组行相应对比，p-p38蛋白相对量进行相应的检验分析，认为结果有意义。
　　结论:外源性硫化氢可以影响烧伤后大鼠体外培养皮肤巨噬细胞MAPK传导通路，表现为促进p-ERK的表达，抑制p-JNK和p-p38的表达。