脂联素、肿瘤坏死因子-α基因多态性及其血清水平与2型糖尿病遗传易感性研究

摘要

目的：　探讨宁夏汉族人群中2型糖尿病的遗传易感性。通过对国内外已证实与2型糖尿病关联的脂联素、肿瘤坏死因子-α二个基因多态性位点作为本课题的候选基因位点，采用分子遗传学技术和群体遗传学统计方法，以明确它们与宁夏汉族人群2型糖尿病的相关性。逐一验证的2个候选基因多态性位点分别为：脂联素（ADPN）基因的+45单核苷酸多态性、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因启动子区-308位点单核苷酸多态性；检测脂联素、肿瘤坏死因子-α血清浓度以及相关的体重指数、生化指标等。在上述研究基础上探讨在宁夏汉族人群2型糖尿病的发病过程中ADPN的SNP45位点基因多态性与肥胖、胰岛素抵抗之间的关联性；初步探讨ADPN的SNP45位点基因多态性与血清水平的相关性；研究2型糖尿病患者中的ADPN血清水平与体重指数(BMI)、胰岛素抵抗指数、TNF-α等相关因素的关系及在糖尿病心血管病变中的作用，探讨ADPN、TNF-α基因多态性在2型糖尿病发生发展中的作用及机制。 方法：　采用聚合酶链反应(PCR)、限制性片断长度多态(RFLP)等分子遗传学方法，检测随机抽取的100例2型糖尿病患者和101例无糖尿病家族史的健康对照中2个候选基因的多态性；同时测定全部受试对象的体重指数(BMI)、空腹静脉血糖(FPG)、血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)等生化指标；采用放射免疫法(RIA)，分别测定空腹血清胰岛素(FINs)、TNF－α水平；采用酶联免疫吸附法(ELISA法) 测定血清 ADPN水平；用HOMA胰岛素抵抗指数(HOMA－IR=FPG×FINs/22.5)评价2型糖尿病患者的胰岛素抵抗情况。通过Case-Control比较，统计分析这些基因多态性在2型糖尿病人群和正常人群中的分布特点、这些基因多态性及其血清水平与宁夏汉族人群中2型糖尿病的关联性。 结果：对照人群中的2个基因多态性位点的频率经遗传平衡定律检验，均符合基金项目：国家自然科学基金（30260045），宁夏自然科学基金（A4005）Hardy-Weinberg平衡法则，表明各基因频率在宁夏汉族人群中已达遗传平衡，所选择群体具有群体代表性2型糖尿病组的BMI、空腹血糖、空腹胰岛素、甘油三脂、总胆固醇、低密度脂蛋白、胆固醇、Homa-IR等指标水平均高于健康对照组(P<0.05)；血清ADPN、高密度脂蛋白胆固醇均低于健康对照组(P<0.05)；血清TNF-α在两组间无显著性差异。2型糖尿病组和健康对照组间基因型和基因分布频率的比较显示：ADPN基因中SNP45多态性G基因的分布频率在两组间有显著性差异(37％ vs 23％, P<0.01)，OR值为1.99，95％ 可信区间（95％CI）下限为1.28；而TNF-αSNP-308多态性位点的基因型和基因频率在2型糖尿病患者与对照组间没有显著性差异(P>0.05)。 ADPN-SNP45 GG+TG基因型组与TT基因型组相比，各指标如下：在2型糖尿病组BMI≥25.0kg/m2 组的GG+TG 基因型频率高于 BMI<25.0kg/m2组，G基因频率也高于BMI<25.0kg/m2组（P<0.05），GG+TG基因型的HOMA-IR与TT基因型比较，两组间有显著性差异（P<0.05），经BMI校正后，该差异仍存在（P<0.05）；GG+TG基因型的血清ADPN浓度低于TT基因型，两组间有显著性差异（P<0.0 5）。而在正常对照组中，各基因型间BMI、HOMA-IR、血清ADPN浓度无显著性差异，表明ADPN-SNP45T/G多态性与超重肥胖、HOMA-IR、血清ADPN水平有一定关联性。在糖尿病患者中BMI≥25.0kg/m2组血清ADPN水平明显低于BMI<25.0kg/m2 组(F=5.54，P <0.05)，调整性别、年龄和BMI等混杂因素后，单因素相关分析显示：血清ADPN与BMI呈负相关，（相关系数分别为: r =-0.313，P =0.036， P<0.05），与TNF-α等指标无相关性。 结论：　ADPN基因SNP+45多态性与宁夏汉族人群的2型糖尿病相关，G基因可直接或间接决定2型糖尿病的遗传易感性；TNF-α基因SNP-308多态性与宁夏汉族人群中2型糖尿病发病的无明显相关性，TNF-α基因SNP-308携带者患肥胖的可能性更大；ADPN-SNP45T/G 多态性与肥胖、胰岛素敏感性、血清ADPN水平有一定关联性；血清ADPN与BMI呈负相关，与TNF-α无相关性。