DEHP宫内暴露对小鼠睾丸生殖毒性研究

摘要

邻苯二甲酸二（2-乙基-己基）酯（DEHP）是一种常用塑化剂，因其对自然环境和人体健康有许多不利影响而受到广泛关注。DEHP广泛存在于各种塑料制品中，如食品包装、儿童玩具、医疗产品、建筑材料和汽车用品等。DEHP与塑料基质之间是非共价键结合，经常使用或者受热可以溢出，进入环境，造成环境污染。DEHP可以通过吸入、摄入、注射、皮肤接触等途径进入人体，影响人类的身体健康。研究发现，DEHP能引起神经毒性、免疫毒性、胚胎毒性和生殖毒性等，其中生殖毒性尤为显著。睾丸作为雄性动物生殖器官，其主要功能是产生精子和雄性激素，维持男性生殖功能。睾丸是DEHP生殖毒性的靶器官，研究发现DEHP暴露会引起隐睾及类似人类睾丸发育不全综合征的症状等雄性生殖损伤。
　　为研究DEHP对F1代小鼠睾丸的生殖毒性作用，本实验通过腹腔注射途径建立DEHP宫内暴露引起的子代雄鼠生殖毒性模型，从组织形态、激素调节和细胞凋亡三个方面探讨DEHP对睾丸的毒性作用。DEHP染毒时间为孕期第13天到孕期第19天，DEHP浓度分别为62.5、125、250和375mg/kg/day，对照组注射等量橄榄油。记录孕鼠产仔数量、子代小鼠雌雄比例，称量F1代40日龄、60日龄、90日龄雄性小鼠体重，睾丸湿重，检测F1代90日龄雄性小鼠精子畸形率。通过放射免疫分析检测F1代40日龄、60日龄、90日龄雄性小鼠血清中T、E、LH、FSH水平。Weston blot检测F1代小鼠睾丸中睾酮合成相关酶Star和Cyp17a1的表达情况。制作F1代小鼠睾丸石蜡切片，对90日龄F1代小鼠睾丸组织石蜡切片进行HE染色，观察睾丸组织形态变化。TUNEL检测观察F1代小鼠睾丸内细胞凋亡情况。免疫组织化学检测雄激素结合蛋白、促凋亡蛋白P53在睾丸中的表达情况。
　　结果发现：
　　①DEHP导致F1代40日龄雄性小鼠睾丸湿重上升，精子畸形率上升，F1代与F2代小鼠雌雄比例上升。睾丸组织石蜡切片HE染色发现睾丸曲细精管中出现空泡化、多核细胞、不正常细胞团块，睾丸中曲细精管之间的间隙变大，生精细胞层缺失，生精周期紊乱等。
　　②DEHP造成40、60和90日龄F1代雄性小鼠血清睾酮（T）水平下降，60日龄F1代雄性小鼠血清雌二醇（E）水平上升，40日龄和60日龄血清促黄体生成素（LH）水平上升，60日龄、90日龄小鼠睾丸组织中雄激素结合蛋白（ABP）浓度异常。
　　③DEHP能诱导睾丸中生精细胞和支持细胞凋亡，随剂量增加，凋亡细胞明显增加。
　　结果表明，宫内暴露DEHP可能通过影响胚胎发育，造成下丘脑-腺垂体-睾丸轴紊乱，引起性激素浓度异常，从而引起子代小鼠雌雄比例升高和睾丸发育异常，并且这种异常在胚胎发育过程中逐渐表现出来，导致精子畸形率上升，睾丸组织结构异常，破坏生精过程，诱导生精细胞和支持细胞凋亡，造成睾丸雄性生殖损伤。
　　本研究初步研究DEHP生殖毒性机制，为进一步深入研究DEHP的生殖毒性机制提供理论借鉴。

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第一章 论文综述

1 睾丸结构及功能

1.1 睾丸的形态结构

1.2 睾丸间质细胞

1.3 睾丸支持细胞

1.4 精子发生

1.5 生精上皮周期

1.6 精子发生的调节

2 DEHP及其毒性

2.1 DEHP概述

2.2 DEHP暴露

2.3 DEHP代谢

2.4 DEHP毒性

2.5 DEHP雄性毒性的敏感阶段

2.6 DEHP导致雄性雌性化主要检测指标

第二章 研究论文

1 引言

2 实验材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验试剂与配制

2.3 实验仪器

2.4 实验方法

3 实验结果

3.1 DEHP抗雄性作用常规指标检测结果

3.2 DEHP对性激素水平及激素相关蛋白表达的影响

3.3 DEHP对睾丸生精细胞凋亡的影响

4 讨论与分析

参考文献

致谢