微针阵列经皮促透NGF用于皮肤感觉重建治疗的研究

摘要

目的:观察微针阵列作用后，神经生长因子（Nerve growth factor，NGF）经皮给药的分布、皮内和血浆药物浓度，探索NGF促进移植皮肤感觉恢复的微创给药方法。
　　方法:离体兔皮：用亚甲蓝染色法观察微针阵列处理后微孔的分布和排列，冰冻切片HE染色法观察和测量微孔的深度和直径。在体研究：建立兔皮片移植模型，采用直接涂布、微针促透涂布和皮内注射给药，Elisa法检测给药6h后皮肤匀浆液和1h~6h血浆内NGF的含量，免疫组化染色法观察皮肤组织切片中NGF的分布和神经纤维再生的情况。
　　结果:离体兔皮经长度250μm、500μm和1000μm，直径150μm的微针阵列处理后，1000μm微针阵列组可见排列均匀的微孔，针道穿透角质层达到真皮浅层，平均深度、宽度和针孔数量分别为174±81μm、69±14μm和32±1，250μm和500μm微针阵列组微孔的平均深度和数量低于1000μm微针阵列组；皮片移植兔的在体研究显示，给药6h后，皮内注射组和微针促透组的皮肤组织匀浆液中NGF含量分别是22.74％和19.36%，两组比较差异无显著性意义(P>0.05)，但较直接涂布组(3.52%)分别高出6.46倍和5.50倍(均P<0.05)。血浆NGF峰值浓度分别是84.13±10.61pg/ml和41.69±10.7pg/ml，两组比较差异有显著性意义(P<0.05)，但微针阵列促透组较皮内注射组持续时间长且含量稳定，直接涂布组(10.91±2.35pg/m)含量较低。免疫组化染色显示，微针促透组的真皮组织中有大量NGF存在，且分布均匀，,越靠近角质层含量越高；皮内多点注射组,注射点周围皮肤有大量的NGF聚集，分布不均匀；直接涂布给药组,NGF主要停留在皮肤角质层的表面,毛囊和腺体中有少量分布。给药30天后，移植皮肤S100免疫组化染色显示，微针促透组和皮内注射组可以诱导皮肤神经再生，直接涂布组未看到再生的神经纤维。
　　结论:通过微针阵列在皮肤上形成的微通道，可使NGF顺利透过角质层到达真皮层，实现对NGF微创、高效的促透，促进移植皮肤感觉重建。

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英文缩略词表

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前 言

材料与方法

1 材料

2 微针长度的优化

3配置NGF水凝胶

4 动物植模型制备

5 兔血清NGF含量测定

6 兔皮肤组织中NGF含量测定

7 兔皮肤组织样本免疫组化染色

8 统计学处理

结 果

1 经微针处理后离体皮肤的微孔

2 在体皮肤NGF含量

3 血浆NGF含量变化

4 兔皮肤组织样本NGF免疫组化染色

5 兔皮肤组织样本S100免疫组化染色

讨 论

结 论

图及相片

参考文献

文献综述

综述一

综述参考文献

综述二

综述参考文献

致谢

四、攻读学位期间发表的学术论文

个人简历