转基因抗虫玉米Bt毒蛋白基因的筛选与鉴定

摘要

该试验利用RAPD、Bt毒蛋白基因特异PCR引物和选择标记基因及化学试剂Broxin涂抹鉴定技术,寻找并鉴定Bt毒蛋白基因的方法,为转Bt毒蛋白基因玉米抗虫基因的快速回交转育、选育综合性状优良的抗虫玉米自交系和杂交种,提供一种或多种不受环境条件影响,便于早期选择的遗传标记.以期大幅度提高抗虫玉米的育种效,加快育种过程.率

目录

摘要

1前言

1.1玉米螟的发生、危害及防治措施

1.2转Bt毒蛋白基因玉米研究进展

1.2.1转Bt毒蛋白基因抗虫玉米的获得

1.2.2 Bt毒蛋白基因在转基因玉米中的遗传分离与整合

1.2.3转Bt毒蛋白基因玉米的杀虫机制及效果

1.2.4转Bt毒蛋白基因玉米的商品

1.2.5玉米螟对转Bt毒蛋白基因玉米的抗性及其预防策略

1.2.6应用转Bt毒蛋白基因玉米潜在的生态风险性

1.3 RAPD标记技术在作物抗性育种中的应用

1.4本试验的目的和意义

2材料与方法

2.1试验材料

2.2试验方案

2.2.1 RAPD标记的筛选

2.2.2 Bt毒蛋白基因特异引物的合成与筛选鉴定

2.2.3利用选择基因或Bt毒蛋白基因对化学试剂Broxin的敏感性鉴定Bt毒蛋白基因

2.2.4分子标记辅助选择效果的探讨

2.3试验方法

2.3.1材料种植和取材

2.3.2基因组DNA提取

2.3.3模板DNA池的构建

2.3.4 RAPD、PCR分析

2.3.5选择剂和化学试剂涂抹分析

2.3.6抗虫性鉴定

3结果与分析

3.1供试基因组DNA

3.2 RAPD标记的筛选与鉴定

3.2.1特异引物的筛选

3.2.2 RAPD扩增结果的重复性

3.2.3转基因抗虫玉米Bt毒蛋白基因的RAPD标记鉴定

3.3 Bt基因特异引物的筛选与鉴定

3.4选择基因的鉴定

3.5化学试剂Broxin Bt毒蛋白基因鉴定效果

3.6分子标记辅助选择效果分析

4讨论

4.1鉴定选择基因失败的可能原因

4.2 RAPD扩增结果的重复性

4.3 Bt毒蛋白基因三种鉴定方法的评价及其在育种中的应用

4.4两种分子标记的比较

4.5进一步研究的设想

参考文献

致谢

图版