我国近年来马立克氏病病毒野毒株分子流行病学和生物学特性的研究

摘要

为了研究中国近年来鸡群中马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)流行毒株的致病性变异状况及其分子衍化规律,该文采用细胞培养、间接荧光抗体试验、病理组织学检查、斑点杂交和PCR扩增的方法从中国各地不同省份的鸡场采集样品进行马立克氏病病毒(MDV)的分离和鉴定.从63只疑似肿瘤鸡采集的全血接种鸡胚成纤维细胞(CEF)后分离到19株MDV野毒株.这19株MDV野毒株的细胞培养中,有7株MDV感染的细胞不与禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)的单抗11B154和11B118反应,用聚合酶链式反应(PCR)也扩增不出REV的长末端重复序列(LTR);另有7株MDV感染的细胞既能与REV的单抗反应,又可以用PCR扩增出REV的LTR,表明这7株MDV感染的细胞中含有完整的REV游离病毒;另有5株MDV感染的细胞与REV核酸标记的探针呈现阳性反应,也能扩增出REV的LTR,但却不与REV的单抗反应,表明这5株MDV的基因组中可能已整合了REV的基因组成分;这些结果表明中国MDV野毒株中REV的共感染现象十分普遍,并且很可能部分MDV毒株的基因组中已经整合了REV的基因组成分.为了研究MDV和REV在对鸡的致肿瘤过程中的相互作用,该文用REV和MDV共感染1日龄雏鸡,结果表明,雏鸡共感染MDV和REV后24天即可发生死亡,到94日龄时死亡率已达63.3％;而单独感染MDV和REV后的死亡日龄分别出现在感染后47日龄和45日龄,且94日龄时的死亡率分别为33.3％和36.7％.该文运用差异表达显示技术(Differential Display Polymerase Chain Reaction,DD-PCR)的方法对我们分离和鉴定的含有禽网状内皮组织增生病病毒成分的MDV天然重组毒株GX0101和GD0202进行病毒基因差异表达的研究.结果表明GD0202的gB糖蛋白基因和GX0101的肿瘤相关的1.8KB mRNA为差异表达基因.在对分离和鉴定到的两株MDV天然重组毒株GX0101和GD0202进行致病性试验中,1日龄雏鸡分别接种GX0101和GD0202以及GA株,在接种后21日龄、38日龄、76日龄和94日龄分别采血、称重和进行病理组织学检查.

目录

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英文缩略词

文献综述

综述一

综述二

第一部分 我国近年来MDV野毒株的分离鉴定和REV共感染状态的调查

试验一 我国近年来MDV野毒株的分离和鉴定

1材料和方法

2结果

3讨论

试验二 我国MDV野毒株中REV共感染的研究

第二部分 REV共感染对MDV的影响

试验三 REV和MDV共感染对鸡致病性的影响

试验四 REV共感染对MDV体外培养的影响

第三部分 整合REV基因组的重组MDV野毒株的分离和鉴定

试验五 整合进REV基因组片段的鸡MDV重组野毒株的分离和鉴定

试验六 用DD-PCR研究MDV重组野毒株差异基因的表达

1材料和方法

2结果

3讨论

第四部分 重组野毒株的致病性试验

试验七 MDV天然重组野毒株致病性的研究

1材料和方法

2结果

3讨论

试验八 REV共感染对MDV天然重组毒株致病性的影响

第五部分 MDV野毒株pp38、meq、gI和gE基因的克隆和序列分析

试验九 我国MDV野毒株meq基因的克隆和序列分析

试验十 我国MDV野毒株gI基因的克隆和序列分析

试验十一 我国MDV野毒株gE基因的克隆和序列分析

试验十二 我国MDV野毒株pp38基因的克隆及其点突变株的构建

总结

参考文献

就读博士期间发表的主要论文

作者简介

致谢