鸡贫血病病毒和马立克氏病毒实验室检测方法的建立和应用

摘要

近年来,免疫抑制性病毒越来越受到人们的关注.鸡群中存在免疫抑制性病毒的感染,会使鸡群对其它病毒或细菌不仅变得更为易感,而且使其感染的症状、病变不典型.除此之外,还会造成鸡群对某些疫苗的免疫反应下降甚至不反应,导致免疫失败.可引起免疫抑制的病毒很多,主要有鸡马立克氏病病毒(MDV)、鸡传染性贫血病病毒(CAV)、J亚群禽白血病病毒(ALV-J)、网状内皮组织增殖症病毒(REV)、鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)和呼肠孤病毒(ReoV)等.这些病毒往往共同作用,以二重感染或多重感染的方式造成鸡的免疫抑制,使疾病的诊断更加复杂.鉴于以上原因,建立准确可行的检测免疫抑制性病毒的方法是非常必要的.在该研究中我们设计了四个试验,对CAV和MDV的检测方法及某些毒株的免疫抑制性进行了初步研究.

目录

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英文缩略表

前言

(一)鸡传染性贫血病的研究进展

1.鸡传染性贫血病及其病原

2.鸡传染性贫血病病毒及其特性

3.流行病学

4.临床及病理变化

5.CAV的发病机理

6.免疫抑制表现

7.免疫抑制机理

8.诊断方法

(二)鸡马立克氏病的研究进展

1.鸡马立克氏病及其病原

2.鸡马立克氏病病毒及其特性

3.流行病学

4.致病机理

5.免疫制机理及表现

6.免疫抑制表现

7.MDV的诊断方法

(三)本研究的目的、意义

实验一 鸡贫血病病毒检测方法的初步研究

1.材料与方法

1.1病料来源

1.2 CAV易感细胞

1.3病料的处理

1.4病料组织DNA的制备

1.5 CAV易感细胞培养

1.6病料感染MSB1细胞

1.7病料感染细胞DNA的提取

1.8间接免疫荧光反应(IFA)

1.9 PCR引物设计与合成

2.0引物

2.1克隆载体和宿主菌

2.2 PCR扩增反应

2.3 PCR产物DNA电泳

2.4 PCR产物的纯化

2.5 DNA的连接反应

2.6 BL21大肠杆菌感受态细胞的制备

2.7连接产物的转化

2.8质粒DNA的提取

2.9阳性质粒DNA的酶切鉴定

3.结果

3.1 PCR检测结果

3.2 抗CAV高免血清间接免疫荧光反应(IFA)结果

3.3重组质粒酶切鉴定结果

3.4阳性克隆序列测定结果

4.讨论

5.附图及序列分析

实验二鸡贫血病病毒检测方法的初步应用

1.材料与方法

1.1试验用病毒

1.2试验用鸡胚

1.3标记探针用DNA

1.4地高辛标记检测试剂盒

1.5试验设计

1.6探针的标记

1.7斑点杂交与PCR试验模板的处理

1.8标记探针对样品DNA的检测

1.9 PCR反应

2.结果

2.1 测定EID50的鸡胚组织DNA斑点杂交结果

2.27日龄鸡免疫器官指数与红细胞数

2.3剖检变化

2.4斑点杂交结果

2.5 PCR结果

3.讨论

4.附图

实验三悬浮法IFA检测鸡血液淋巴细胞中MDV的初步研究与应用

1.材料与方法

1.1MDV病毒

1.2试验用鸡

1.3动物接种与饲养试验

1.4 PBMCs的分离制备

1.5 IFA所用单抗

1.6 间接免疫荧光反应(IFA)

2.结果

3.讨论

4.附图

实验四、马立克氏病病毒感染鸡对新城疫疫苗和法氏囊疫苗免疫反应的影响

1.材料与方法

1.1试验用MDV病毒

1.2试验用疫苗

1.3试验用鸡

1.4分组、免疫及攻毒

1.5定期采血

1.6血清NDV的HI抗体测定

1.7血清IBDV抗体ELISA效价测定

1.8数据处理

2.结果

2.1 MDV感染对疫苗免疫后的抗NDV的HI抗体的影响

2.2 MDV感染对疫苗免疫后的抗IBDV抗体反应的影响

3、讨论

本研究的主要结论

参考文献

攻读学位期间发表论文情况

致谢