室内人工饲养中华蜜蜂技术及卵显微注射ECFP基因的研究

摘要

中华蜜蜂(ApisceranaceranaFabricius，简称中蜂)是我国宝贵的蜂种资源。中蜂卵和幼虫的室内人工饲养至今尚未成功。建立完整的室内人工饲养中蜂卵和幼虫的技术体系，是研究中蜂的营养需要、生长发育及转基因工作的前提；在此基础上，对蜜蜂开展卵显微注射转基因研究是利用蜜蜂作为生物反应器生产动物药用蛋白的基础工作。 本研究以中华蜜蜂卵和幼虫为研究对象，以实验室内其正常发育为目标，模拟自然状况下蜜蜂卵和幼虫发育的环境条件，探索可行的蜜蜂卵和幼虫的饲养模式；以ECFP基因为目的基因，通过卵显微注射方法，将外源基因导入蜜蜂卵内，尝试建立蜜蜂卵显微注射转基因的方法。获得如下试验结果： 1.在实验室内成功实现了对中蜂卵的人工培养。人工培养0-6h之内的卵(95％R.H，34℃)，其存活率为11.1％： 2.通过筛选，获得了比较理想的中蜂幼虫同粮营养配方，为大规模进行中蜂幼虫的人工培养提供了营养参数： 3.日转移和不转移两种移虫模式下蜜蜂幼虫化蛹数差异显著(p＜0.05)，不转移组较日转移组化蛹率高出12.7％，成活率高出9.7％，说明不转移法优于日转移幼虫的移虫模式： 4.采用单酶切、双酶切和PCR方法鉴定了分别含有piggyBacORF和目的基因3×P3-ECFP的质粒载体pCasper-hs-orf和pXL-BacⅡ-ECFP； 5.利用显微注射法对中蜂0～4h卵注射ECFP基因，注射后的卵采取实验室内人工饲养和放入蜂群由护理蜂照料两种培养方式，荧光检测蜂卵样品未现阳性个体。 本研究成功实现了在实验室内对中蜂卵和幼虫的人工培养，获得了适宜的环境参数和营养参数，确定了“不转移法”移虫模式；对中蜂卵显微注射外源基因，未检出表达个体，说明中蜂卵显微注射的很多技术细节有待于进一步研究和改进。

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引言

1.中华蜜蜂资源及特性

2.蜜蜂幼虫室内饲养研究进展

3.蜜蜂转基因研究进展

3.1蜜蜂转基因方法

3.2报告基因ECFP的优点

4.本研究的目的和意义

试验一室内中华蜜蜂卵和幼虫的人工培养

1材料与方法

1.1试验材料

1.2试验方法

1.3统计方法

2结果与分析

2.1实验室内人工培养下中蜂卵的存活率

2.2不同同粮组分饲喂的中蜂幼虫的发育

2.3不同移虫模式下中蜂幼虫的培养

2.4培养板对中蜂幼虫发育的影响

3讨论

3.1影响室内人工培养中蜂卵发育的因素

3.2 日粮对中蜂幼虫发育的影响

3.3不同移虫模式对室内人工饲养中蜂幼虫的影响

3.4病原微生物对室内人工饲养中蜂幼虫的影响

3.5实验室内饲养中华蜜蜂幼虫的前景

4.小结

试验二中华蜜蜂卵显微注射ECFP基因的研究

1.材料与方法

1.1试验材料

1.2试验方法

2结果与分析

2.1质粒鉴定

2.2卵显微注射ECFP基因

3讨论

3.1质粒鉴定方法的选择

3.2影响中蜂卵显微注射外源基因的因素

4.小结

本研究主要结论

参考文献

致谢

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