两个马铃薯Y病毒分离物的生物学和分子特性

摘要

马铃薯Y病毒(Potato virus Y，PVY)是全球性分布的重要病毒，主要危害烟草、马铃薯、辣椒、番茄等茄科作物。 本研究从山东安丘和泰安的烟草上分离得到2个PVY分离物AQ4和FZ10。生物学实验表明，这两个分离物在中烟100等12个烟草品种上产生不同程度的花叶和斑驳。 通过RT-PCR和5'-RACE克隆并测定了AQ4和FZ10两个PVY分离物的全基因组序列。除了3'-末端poly(A)尾巴，AQ4和FZ10全长分别为9700个和9699个核苷酸，均含有一个大的开放阅读框，均编码由3061个氨基酸组成的多聚蛋白。这一多聚蛋白被9个酶切位点分成10个功能蛋白。通过对全基因组核苷酸的一致率比较分析，分离物AQ4和FZ10与国内外的PVY分离物的核苷酸一致率分别在97.3％-85.3％和95.2％-83.9％之间。AQ4分离物与261-4分离物的核苷酸一致率最高达97.3％，与NIB-NTN分离物的核苷酸一致率最低为85.3％。FZ10分离物与PVY-12分离物的核苷酸一致率最大达95.2％，与PVY-MN分离物的核苷酸一致率最小为83.9％。它们与国内外的PVY分离物的氨基酸一致率分别在98.6％-92.2％和98.5％-91.8％之间。AQ4和FZ10均为N和O株系分离物的重组体。AQ4分离物1-496nt和2497-9700nt来源于PVYO株系的分离物Oz，497-2496nt来源于PVYN株系的分离物CH-605。FZ10分离物1-496nt和2497-6533nt来源于PVYO株系的分离物SASA-110，497-2496nt和6534-9699nt来源于PVYN株系分离物CH-605。 系统进化树结果表明，AQ4属于PVYN:O亚组，而FZ10属于重组的PVYNTN亚组。AQ4和FZ10的基因型分别属于PVYN:O和PVYNTN，有PVYN株系的HC-Pro，但致病型与PVYO株系相同，说明除了HC-Pro外，还有其它基因控制PVY在烟草上引起坏死症状。

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文摘

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论文说明：缩略词表

声明

1引言

1.1 PVY生物学特性

1.1.1分类地位

1.1.2病毒形态特性

1.1.3病毒传播方式

1.1.4寄主范围

1.1.5危害

1.2 PVY血清学特性

1.3 PVY分子生物特性

1.3.1 PVY基因结构

1.3.2 PVY基因功能

1.4分子变异和株系划分

1.4.1分子变异机制

1.4.2 PVY株系划分

1.5本研究的目的和意义

2材料与方法

2.1材料

2.1.1菌株和载体

2.1.2生化及分子生物学试剂

2.1.3寡核苷酸引物合成

2.2方法

2.2.1病毒的纯化

2.2.2生物学测定

2.2.3植物总RNA的提取

2.2.4反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和多重PCR

2.2.5引物设计

2.2.6反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和5'-RACE扩增

2.2.7 PCR产物回收

2.2.8连接反应

2.2.9大肠杆菌感受态细胞的制备

2.2.10连接产物转化大肠杆菌

2.2.11改良碱裂解法提取质粒DNA

2.2.12重组质粒鉴定

2.2.13序列测定、拼接与分析

3结果与分析

3.1多重PCR检测

3.2 PVY分离物

3.3生物学特性

3.4 PVY分离物的RT-PCR结果

3.5重组质粒的电泳鉴定及PCR鉴定

3.6 PVY分离物的核苷酸与氨基酸序列分析

3.7一致率分析

3.8两个分离物的分子变异情况

3.8.1重组分析

3.8.2系统进化分析

4结论与讨论

参考文献

致谢

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