细粒棘球绦虫原头蚴蛋白质组学研究及生物信息学分析

摘要

目的：在前期研究的基础上,通过双向电泳条件的优化,对细粒棘球绦虫原头蚴进行蛋白质组学和生物信息学分析,进一步研究原头蚴蛋白质的基础构成和功能情况,寻找具有特异性的靶标蛋白,为包虫病的早期诊断、新药开发、疫苗筛选,提供理论依据。
　　方法：1.取宁夏医科大学总医院肝胆外科包虫病人术后的包囊,经无菌分离细粒棘球绦虫原头蚴。2.对原头蚴蛋白质样品并进行双向电泳分离,并对双向电泳条件进行优化。3.选择分离的蛋白点进行MALDI-TOF/MS检测得到肽指纹图谱PMF。4.将PMF数据提交到互联网中蛋白信息研究数据库中,与已有的蛋白信息进行匹配分析,初步鉴定出样本中蛋白质,通过COGs(ClustersofOrthologousGroupsofproteins)蛋白质直系同源簇数据库、GO(GeneOntology)蛋白质功能分类数据库、KEGGpathway蛋白质代谢通路数据库,分析这些蛋白的功能与性质。5.利用免疫印迹的方法,用包虫病人的血清识别原头蚴抗原,并进行质谱鉴定及生物信息学分析。
　　结果：1.通过原头蚴蛋白质样品的双向电泳分析,获得了330个蛋白点。2.从双向电泳凝胶上切下来的蛋白点通过MALDI-TOFMS质谱检测,原头蚴样品中有157个蛋白点获得了肽指纹图谱(PMF)数据。3.初步鉴定了细粒棘球蚴原头蚴中的部分蛋白点,共有49个蛋白点。4.对鉴定得到的蛋白点,我们进行了生物信息学的初步分析,发现这些蛋白主要与细胞组成、新陈代谢、信号转导以及物质运输有关。5.对原头蚴蛋白利用包虫病人的血清对对原头蚴蛋白进行westernblot的识别,成功识别了80个蛋白点,并对这些蛋白点进行质谱鉴定,最后有28个蛋白点得到鉴定。
　　结论：通过双向电泳条件的优化,成功建立了细粒棘球绦虫原头蚴蛋白质双向电泳图谱;利用蛋白质组学和生物信息学技术,进一步研究原头蚴蛋白质的构成和功能情况,成功建立了细粒棘球绦虫原头蚴蛋白质组基础数据库

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前 言

第一部分 原头蚴蛋白质组学分析

1 实验材料

2 实验方法

结 果

1 双向电泳结果

2 原头蚴蛋白鉴定结果

3 原头蚴蛋白生物信息学分析

讨论

1 原头蚴蛋白质双向电泳条件优化结果

2 原头蚴蛋白质的谱检测与鉴定结果

3 原头蚴蛋白质鉴定结果的生物信息学分析

第二部分 包虫病人抗血清对原头蚴抗原的筛选

1 实验材料

2 实验方法

结果

讨论

参考文献

文献综述

致谢

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