玉米自交系幼胚转化体系建立及DWF4基因的农杆菌介导转化

摘要

玉米是重要的粮饲兼用作物，对于我国经济和社会发展具有重要意义。玉米的遗传改良是生物技术育种和种质创新的重要途径。本研究以齐319、昌7-2、178、18-599玉米自交系幼胚为试材，系统研究了幼胚遗传转化受体系统建立和农杆菌介导影响因素，并运用农杆菌介导方法将油菜素类酯生物合成相关酶基因DWF4进行遗传转化，获得了转基因植株。主要研究结论如下：
　　 1、幼胚受体系统建立研究发现，在外植体雌穗授粉后10～15天，取长度为1.6 mm的幼胚,24～25℃盾片向上培养，胚性愈伤不但得率最高，而且质量较好，最适宜做转化受体；在诱导培养基中添加“2,4-D(3.0 mg L-1)＋NAA(0.2 mg L-1)”可以显著增加胚性愈伤组织的形成，其中，齐319出愈率能达到100％，昌7-2、178出愈率可以达到85％和35％；筛选剂巴龙霉素的愈伤浓度分别确定，齐319三轮筛选的PRM浓度依次为80、120和80 mg L-1，18-599为90、120和90 mg L-1，昌7-2为55、100和55 mg L-1。
　　 2、在农杆菌浸染时，容易控制浸染过程的菌液浓度和浸染时间组合为“菌液浓度(OD600=0.4)和浸染时间(10 min)”；“培养基+滤纸”的共培养方式也可以很好地降低浸染过度率。
　　 3、对得到的31株转基因植株进行PCR和RT-PCR检测，得到3株阳性植株，阳性植株率为12.9％，转化率为0.26％。

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1 引言

2 材料与方法

3 结果与分析

4 讨论

5 结论

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