补益营卫方对衰老皮肤EGF、MMP-2、MMP-3、TIMP-1影响的研究

摘要

目的：1.观察补益营卫方对D-半乳糖衰老小鼠模型皮肤中EGF、MMP-2、MPP-3的影响，探讨补益营卫方延缓皮肤衰老的机制。2.观察补益营卫方药物血清作用后，对衰老人成纤维细胞中TIMP-1的影响。
　　方法：1.90只小鼠随机分为六组，每组15只。除正常组外，其它各组每日背部皮下注射10％D-半乳糖(1000mg/kg)，建立亚急性皮肤衰老模型。补益营卫方高、中、低剂量组分别按8g/kg，4g/kg，2g/kg灌胃给药，维生素E组50㎎/kg灌胃给药连续六周。六周后，用10%的硫化钠溶液脱去背部鼠毛，剪取小鼠背部皮肤制作组织切片，应用免疫组织化学法和计算机图像分析系统对EGF、MMP-2、MPP-3表达进行分析。2.雄性清洁级SD大鼠30只，以补益营卫方按照8g/kg灌胃，每日一次，连续一周，第8天末次给药1小时后，10%水合氯醛腹腔注射麻醉，无菌操作进行心脏采血，将血液室温静置2h，2500rpm离心15分钟，取出血清，超净工作台无菌过滤，56℃灭活30分钟，-80℃冰箱中保存备用。同时以DMEM培养基稀释为含10%的含药血清的培养液。将人皮肤二倍体成纤维细胞分为年青细胞组(第10代)，老龄细胞组(第40代)，补益营卫方干预组。分别培养24h、48h、72h后收集细胞上清，用ELISA方法检测TIMP-1浓度进行分析。
　　结果：皮下注射10%D-半乳糖(1000mg/kg)建立衰老模型后，小鼠皮肤中EGF表达减少，与其他各组相比有显著统计学意义(P<0.05)。应用补益营卫方高、中、低剂量组处理后，可显著提高皮肤EGF的表达，但与正常组相比较无统计学意义(P>0.05)，与模型组相比均有提高，其中高剂量组与模型组具有显著的统计学意义(P<0.01)，中、低剂量组与模型组比较无统计学意义(P>0.05)。高剂量组与阳性对照组比较具有统计学意义(P<0.05)。
　　建立模型后，模型组MMP-2表达增加，其变化具有统计学意义(P<0.05)，灌服补益营卫方后可减少皮肤中MMP-2的表达，高剂量组优于阳性对照组(P<0.05)、低剂量组(P<0.05)。
　　建立模型后，模型组MMP-3表达明显增加，与正常组、阳性对照比较具有统计学意义(均P<0.05)，经补益营卫方高、中、低剂量组处理后MMP-3表达略有降低，与模型组相比无统计学意义(P>0.05)，三个剂量组之间也没有明显差异(P>0.05)，与阳性对照组比较有统计学意义(P<0.05)。
　　人皮肤二倍体成纤维细胞经过培养后，衰老细胞组中的TIMP-1浓度在24h、48h两个阶段均不同程度的降低，其变化具有显著统计学意义(P<0.01)，在72h无明显统计学意义(P>0.05)。补益营卫方血清干预组，24h所测得TIMP-1浓度高于年青组(P<0.05)。48h、72h所测得的TIMP-1浓度低于年青组，无明显统计学意义。
　　结论：1.补益营卫方可以增加衰老皮肤内EGF的表达。
　　2.补益营卫方可以降低衰老皮肤内MMP-2的活性。
　　3.补益营卫方可以调节衰老人皮肤成纤维细胞中TIPM-1的浓度，表现为24h、48h时间段增加，72h时间段降低。
　　4.补益营卫方通过影响衰老皮肤内EGF、MMP-2的表达，调节人皮肤成纤维细胞中TIPM-1的浓度，起到延缓皮肤衰老作用。

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前言

实验一 补益营卫方对衰老皮肤中EGF表达的影响

材料

方法

结果

讨论

实验二 补益营卫方对衰老皮肤中MMP-2、MMP-3表达的影响

材料

方法

结果

讨论

实验三 补益营卫方对衰老人成纤维细胞中TIM P-1的影响

材料

方法

结果

讨论

结论

附图

参考文献

综述

参考文献

致谢

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