新生仔猪流行性腹泻病理学观察及发病相关因素调查

摘要

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea， PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcineepidemic diarrhea virus， PEDV)引起的新生仔猪的严重病毒性疾病，PED历来是是养猪业的常见病，也是制约养猪业发展的一个瓶颈，无论是集约化猪场还是中小型猪场，都不同程度的存在该病，农村散养户因条件差，病情更加严重。近年来发生的高致病性流行性腹泻病毒致病性显著增强，全国广为流行，导致大批仔猪死亡，未死仔猪也呈生长停滞，给养猪业造成了极大的经济损失。
　　 本研究通过位于淄博、莱芜、诸城3个发生新生仔猪腹泻的规模化猪场收集病死仔猪，进行病理学及分子生物学的检测，结果表明，当前流行的PEDV毒株的毒力已显著增强，除导致严重的出血性卡他性胃肠道炎症外，全身呈败血症性病变，部分病例还伴有其他病原感染或中毒性病变，经临床病理学、分子生物学等综合诊断最终确定主要由猪流行性腹泻病毒感染所致，部分病例有猪瘟病毒及其他病原混合感染。
　　 为进一步了解该病的传染源与发病相关因素，尤其是与母体相关的风险因素，自2012年9月份以来在上述3场采集了86份母猪初乳，通过在初乳内检测猪瘟病毒、蓝耳病病毒、伪狂犬病病毒、圆环病毒、流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒以及黄曲霉毒素M1，来探讨初乳与仔猪腹泻的关联性。另外，为研究母猪初乳与仔猪血清之间带毒及抗体含量的相关性，采集7头母猪的初乳与其仔猪的脐带血，对6种病毒带毒情况以及猪瘟与伪狂犬抗体水平进行检测比对。实验结果显示，母猪初乳中可以检测到上述6种病毒以及黄曲霉毒素M1，其中流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒与新生仔猪腹泻的发生相关性极显著(P＜0.01)，猪瘟病毒、伪狂犬病毒与新生仔猪腹泻的发生相关性显著(P＜0.05)，蓝耳病毒、圆环病毒、黄曲霉毒素M1与新生仔猪腹泻的发生相关性不显著(P＞0.05)，但会加重腹泻的程度;在母猪初乳与其对应仔猪脐带血抗体则无相关性，母猪初乳中含有高水平的猪瘟抗体、伪狂犬抗体，而在仔猪脐带血中上述抗体均为阴性，这充分说明在怀孕期母源抗体不能由母体血液直接传给子宫内的胎儿，使胎儿免受病毒感染。
　　 本实验首次在母猪初乳中检测的猪瘟病毒、蓝耳病毒、伪狂犬病毒、圆环病毒、传染性胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒及黄曲霉毒素M1，试验证实母猪初乳带毒与仔猪腹泻的相关性，这一方面提示我们对母猪带毒及饲料霉菌毒素污染问题应高度重视，另一方面，也为我们研究仔猪腹泻乃至相关疾病的传播途径提供了一个新思路及理论依据。

目录

声明

符号说明

摘要

1 前言

1．1 新生仔猪流行性腹泻

1．1．1 病原

1．1．2 流行病学

1．1．3 发病机理

1．1．4 临床症状

1．1．5 病理变化

1．1．6 诊断

1．1．7 防制

1．2 母猪初乳的研究进展

1．2．1 母猪乳房结构

1．2．2 乳的产生

1．2．3 泌乳的维持

1．2．4 排乳的调节

1．2．5 母猪初乳的成分

1．2．6 脂肪

1．2．7 乳蛋白

1．3 初乳的主要功能

1．3．1 直接抵抗肠道致病原，改善胃肠功能

1．3．2 增强机体的免疫力

1．3．3 调节机体生理状态平衡

1．4 初乳中病毒的研究进展

1．5 黄曲霉毒素

1．5．1 黄曲霉毒素简介

1．5．2 黄曲霉毒素的污染现状

1．5．3 黄曲霉毒素的来源

1．5．4 乳汁中黄曲霉毒素的污染

1．5．5 黄曲霉毒素对免疫系统的破坏

1．5．6 黄曲霉毒素的检测方法

1．6 与新生仔猪腹泻相关的疾病

1．6．1 猪轮状病毒病

1．6．2 猪梭菌性肠炎

1．6．3 仔猪大肠杆菌疾病

1．6．4 猪球虫病

1．6．5 伪狂犬病

1．6．6 猪瘟

1．6．7 传染性胃肠炎

1．7 研究目的及意义

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．1．1 试验地点

2．1．2 试验猪群及材料采集

2．1．3 主要仪器

2．1．4 主要试剂及试剂盒

2．1．5 主要试剂的配制

2．2 方法及步骤

2．2．1 规模化猪场仔猪腹泻调查统计

2．2．2 病理学检测

2．2．3 病理组织切片制作

2．2．4 病毒学检测

2．2．5 病毒的RT-PCR扩增

2．2．6 PEDV基因片段PCR产物的纯化回收及验证

2．2．7 初乳中病毒核酸提取

2．2．8 初乳中霉菌毒素检测

3 结果与分析

3．1 眼观病变观察

3．2 病理组织学变化

3．3 分子病毒学诊断结果及分析

3．3．1 RT-PCR结果

3．3．2 重组质粒的鉴定

3．3．3 系统进化结果

3．3．4 其他病原的检测结果

3．3．5 分子病毒学试验结果分析

3．4 初乳中病毒检测结果

3．5 母猪初乳与仔猪脐带血中猪瘟抗体、伪狂犬抗体的相关性

3．6 初乳中黄曲霉毒素M1的检测

3．7 跟踪分析结果

4 讨论

4．1 新生仔猪腹泻病猪的病变特征

4．2 病死仔猪分子病毒学检测结果分析

4．3 母猪初乳与仔猪脐带血中抗体相关性

4．4 初乳中病毒与新生仔猪腹泻的相关性

4．5 黄曲霉毒素M1的检测

5 结论

参考文献

致谢

作者简介及论文发表情况