去势大鼠卵巢移植对海马神经元GPR30、PSD-95及NG表达的影响研究

摘要

目的：观察卵巢移植对去势大鼠海马神经元数量、G蛋白耦联受体30(GPR30)、突触后密度蛋白-95(PSD-95)和神经颗粒素(NG)表达变化的影响,评价卵巢移植对海马神经元的保护作用。
　　方法：成年雌性SD大鼠(体重200g±20g)随机分为正常对照组,卵巢去势组和卵巢移植组,其中卵巢去势组和卵巢移植组在动情间期行双侧卵巢切除术(OVX),卵巢移植组在去势7d后,于肾被膜下移植出生3d内乳鼠的卵巢,各组在干预后的7d、14d、21d和28d处死取材。采用尼氏染色计数海马神经元的数量,观察细胞形态;免疫组织化学法检测GPR30、PSD-95和NG表达情况;Western-blot检测GPR30和PSD-95蛋白表达情况,并做统计学比较分析。
　　结果：(1)形态学观察显示,卵巢去势组,随去势时间延长,海马神经元形态损伤逐渐加重,海马神经元数量逐渐减少,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);卵巢移植组,随移植时间延长,海马神经元形态逐渐恢复正常,海马神经元数量逐渐增加,与正常对照组相比,除CA1区28d组外,其余各组差异有统计学意义(P<0.05)。(2)免疫组织化学染色显示,卵巢去势组,随去势时间延长,海马神经元GPR30、PSD-95和NG表达水平下降,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);卵巢移植组,随移植时间延长,GPR30、PSD-95和NG表达水平逐步回升,与同期卵巢去势组相比,差异有统计学意义(P<0.05),与正常对照组相比,除GPR30的28d组、NG的DG区28d组外,其余各组差异有统计学意义(P<0.05)。(3)western-blot结果,GPR30和PSD-95的表达与免疫组化的结果相似,卵巢去势组,随去势时间延长,海马神经元GPR30和PSD-95蛋白表达量减少,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);卵巢移植组,随移植时间延长,GPR30和PSD-95蛋白表达量逐渐增加,与正常对照组相比,除GPR3021d、28d组外,其余各组差异均有统计学意义(P<0.05)。
　　结论：1、卵巢去势后大鼠海马神经元形态受损,大鼠海马神经元GPR30、PSD-95和NG表达降低。2、卵巢移植可恢复受损海马神经元形态,促进大鼠海马神经元GPR30、PSD-95和NG表达。3、卵巢激素可提高相关神经因子的表达,对海马神经元发挥保护作用。

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前言

材料与方法

1 实验动物

2 实验分组

3 主要试剂

4 主要设备

5 主要溶液的配制

6 载玻片的处理

7 去势动物（OVX）模型的制作

8 卵巢移植方法

9 取材

10 尼氏染色

11 免疫组化

12 脑组织总蛋白提取

13 蛋白含量检测 (BCA法测定蛋白浓度)

14 Western-Blot (SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳)

结果

1 尼氏染色观察

2 免疫组织化学检测

3 western-blot 结果

讨论

1. 雌激素对海马神经元形态、数量的影响

2．雌激素对GPR30的影响

3. 雌激素对PSD-95的影响

4. 雌激素对NG影响

结论

附图

参考文献

雌激素对中枢神经系统的保护作用

致谢

攻读学位期间发表的学术论文