山东地区Ⅰ群禽腺病毒的分离鉴定及多价油乳剂灭活疫苗的研制

摘要

包涵体肝炎(Inclusion Body Hepatitis，IBH)是由Ⅰ群禽腺病毒(Fowl adenovirusⅠ，FAV-Ⅰ)引起的鸡的一种急性传染病。近年来，包涵体肝炎在我国的发病呈上升趋势，给肉鸡饲养业造成了严重的经济损失。因此，本研究了解了山东省鸡包涵体肝炎的流行情况，挑选了四株优势血清型毒株制备多价油乳剂灭活疫苗，其对鸡包涵体肝炎的防治和养鸡业的健康发展具有重要的应用价值。
　　本研究从山东部分地区采集疑似感染鸡包涵体肝炎的肉鸡肝脏，卵黄囊接种5日龄SPF鸡胚盲传三代，收集尿囊液。经PCR鉴定共分离到8株Ⅰ群禽腺病毒，分别命名为SDLY-1、SDLY-2、SDLY-3、 SDYT-1、SDYT-2、SDYN-1、SDYN-2、SDMY。血凝试验显示分离毒株均无血凝性，扩增分离毒株的Hexon基因序列，与GenBank中发表的其他血清型毒株Hexon基因序列比对，结果显示，8个分离株中有2株与血清2型同源性较高，3株与血清10型同源性较高，3株与血清12型同源性较高。动物回归试验结果显示，发病鸡的症状和剖检变化与自然发病鸡一致。
　　从本实验室近年来分离到的Ⅰ群禽腺病毒中，挑选出四株优势血清型毒株制成多价油乳剂灭活疫苗，并对疫苗的免疫效果进行评估，对预防包涵体肝炎的发生和流行提供科学依据。将四株不同血清型的Ⅰ群禽腺病毒(FAV-2、FAV-8、FAV-10、FAV-12)接种SPF鸡胚，收集尿囊液，经甲醛灭活，以矿物油为佐剂制成多价油乳剂灭活疫苗，并对疫苗物理性状，安全性，最小免疫剂量、免疫效力及抗体消长规律进行检测。结果显示，抗原液以甲醛为灭活剂的最适终浓度为1‰，研制的疫苗为油包水剂型，无菌检验合格，物理性状稳定。接种5日龄白羽肉鸡，注苗后均无不良反应，最小免疫剂量为0.3 mL/只。肉鸡免疫2周后开始监测其血清抗体水平，结果显示，免疫后2周抗体效价已达5 ng/L以上，25 d左右抗体浓度达峰值，之后直至肉鸡出栏，抗体效价均高于10ng/L，对照组一直无抗体产生。免疫后IFN-γ和IL-6含量分别在第3d和第7d达到峰值，随后开始缓慢下降至正常水平。免疫保护性试验结果显示，攻毒后临床保护率为100％，能完全抵抗相应血清型病毒的攻击。各项结果表明，研制的油乳剂灭活疫苗具有良好的免疫保护效果。