随着人们生活水平的不断提高，猪肉的品质也随之受到人们越来越多的关注。众多肉品质性状之中，肌内脂肪(IMF)是衡量猪肉品质的一个非常重要的指标，其含量与猪肉的多汁性、嫩度以及风味密切相关。有研究发现，肥胖人群脂肪细胞的增殖与PID1（磷酸酪氨酸互作结构域1）基因密切相关，在肥胖人群中呈高丰度表达。本实验室前期在莱芜猪、鲁莱黑猪、大白猪三个猪种上对PID1基因的研究提示，肌内脂肪的含量与PID1基因密切相关。为进一步研究PID1基因的功能，本实验在前期成功构建并筛选得到的高效PID1基因RNA干扰表达载体pGPU6/GFP/Neo-PID1-2的基础上，利用精子介导法制备RNA干扰PID1转基因肉兔模型，验证PID1基因对肌内脂肪沉积的影响，并以莱芜猪和鲁莱黑猪为实验材料，研究了PID1基因的多态性与肌内脂肪含量的关系。主要研究结果如下: 一、利用前期成功构建的高效干扰表达载体pGPU6/GFP/Neo-PID1-2与Roche的X-treme GENE HP转染试剂共孵育15 min后，加入适当的DMEM配成注射液。将公兔麻醉后，对实验组公兔两侧睾丸进行多点注射，对照组注射等量生理盐水。每周注射一次，共注射三次。在相同且适宜的条件下饲养30天后，试验组和对照组分别按照公母比例1∶6和1∶4进行配种，获得F1代个体。 二、在转基因后代中，妊娠期结束试验组共分娩活仔兔106只，其中阳性兔7只，阴性兔99只，阳性率为6.60％。对繁殖的F1代肉兔个体进行活体荧光检测、PCR检测，并对不同组别（阳性组、阴性组、空白对照组）体重达3.0 kg左右的F1代肉兔抽样屠宰对其背最长肌进行肌内脂肪的测定，并进行qRT-PCR和Western blot验证。在F1代中，试验组转基因阳性兔的肌内脂肪含量显著低于阴性兔和空白对照兔(P＜0.05)，qRT-PCR和Western blot检测结果也显示阳性组PID1基因mRNA和蛋白表达量显著降低;同时也对各组F1代肉兔进行了日增重、全净膛率、半净膛率、肌肉滴水损失、嫩度、屠宰后45 min pH、24 h pH、失水率以及24 h SOD、T-AOC、MDA等指标的检测，结果表明转基因处理对日增重、净膛率、滴水损失、嫩度、24 h pH有显著影响。 三、以莱芜猪和鲁莱黑猪为实验材料（莱芜猪67头，鲁莱黑猪40头），混池测序发现，在PID1基因CDS区的第267位点发生了碱基C→T的突变，SSCP分析发现，在两个品种中，CC型个体肌内脂肪含量为9.77％±5.03％，CT型的肌内脂肪含量为6.11％±1.89％，TT型的肌内脂肪含量为5.71％±2.59％。在两个群体中，C为优势等位基因，基因频率为0.56;在莱芜猪群体中，CC型个体的肌内脂肪含量为10.38％±5.25％，CT型的肌内脂肪含量为6.38％±2.03％，TT型的肌内脂肪含量为6.03％±2.39％，C基因频率为0.6。在鲁莱黑猪群体中，CC型的肌内脂肪含量为7.37％±5.77％，CT型的肌内脂肪含量为5.15％±1.13％，TT型的肌内脂肪含量为4.74％±2.73％，群体中各类基因型分布均达到哈代—温伯格平衡状态。 综上表明，PID1基因与肌内脂肪沉积密切相关。本研究从RNAi肉兔模型构建的角度进一步验证了PID1基因对肌内脂肪沉积影响的功能，也为下一步研究制备高肌内脂肪优质PID1转基因猪奠定了基础。此外，转基因处理后对其他一些肉质性状也存在一定的影响;本研究发现的突变位点可能与肌内脂肪沉积存在联系，还需进一步验证。
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