泰安地区病死鸭胚中志贺氏菌分离鉴定及耐药性调查

摘要

志贺氏菌在临床上可引起细菌性痢疾及肠道的炎症，主要表现为结肠的水肿、溃疡及炎症。大约99％的志贺氏菌病病例发生在发展中国家，儿童和幼龄动物有较高的感染率和死亡率。然而，在种鸭孵化过程中，感染志贺氏菌的鸭胚经常出现死胚和臭蛋。
　　为了对山东省部分地区鸭源志贺氏菌性腹泻进行准确诊断，并为有效防治该病提供可靠依据，本试验对来自山东省泰安市6批次的120只孵化过程中死亡鸭胚进行了志贺氏菌分离鉴定和耐药性试验研究。
　　1.经细菌分离培养、染色观察和生化试验确定符合志贺氏菌特点的疑似志贺氏菌47株。同时根据建立的扩增细菌16SrDNA基因的PCR方法对分离得到的47株细菌进行克隆测序，并与GenBank中序列进行比对，得到47株疑似志贺氏菌与志贺氏菌参考株同源性高达99％以上，确定为志贺氏菌，其分离率为39.17％(47/120)。
　　2.采用Kirby-Bauer法对研究分离鉴定的47株鸭源志贺氏菌分离株进行15种抗菌药物的耐药性检测。结果显示，本研究所有分离的47株志贺氏菌分离株对对15种药物均呈不同程度耐药性，耐药菌株占分离株总数的比在10.6％(5/47)～46.8％(22/47)，其中对庆大霉素产生的耐药性最高，耐药菌株占分离株总数的46.8％(22/47)，其次为多粘菌素B其耐药率达到42.6％(20/47)，大观霉素耐药率为40.4％(19/47)。试验结果表明，同一地区的分离菌株对各种药物的耐药性存在显著差异。

目录

声明

符号及缩略词

摘要

1 前言

1．1 志贺氏菌概述

1．2 志贺氏菌的病原学特性

1．2．1 志贺氏菌的病原学特征

1．2．2 志贺氏菌生化特性

1．3 志贺氏菌致病特点

1．3．1 人志贺氏菌病病变特点

1．3．2 其他宿主志贺氏菌病变特点

1．3．3 侵染机制

1．3．4 志贺氏菌分子发病机制

1．4 诊断技术

1．4．1 细菌分离鉴定

1．4．2 生化鉴定

1．4．3 免疫学检测方法

1．5 分子生物学检测

1．5．1 环介导等温扩增技术

1．5．2 随机引物扩增方法

1．5．3 PCR技术

1．5．4 PCR与16S rRNA序列分析

1．6 防治

1．6．1 志贺氏菌的预防

1．6．2 治疗

1．7 本研究的目的及意义

2 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 病料来源

2．1．2 供试药物及培养基

2．1．3 分子生物学试剂

2．1．4 电泳缓冲液

2．1．5 琼脂糖凝胶的配制

2．1．6 实验仪器设备

2．1．7 引物的设计及合成

2．2 实验方法

2．2．1 细菌的分离培养

2．2．2 革兰氏染色及镜检

2．2．3 生化试验鉴定

2．2．4 模版DNA的制备

2．2．5 PCR扩增目的片段

2．2．6 PCR产物琼脂糖凝胶电泳

2．2．7 PCR产物的回收

2．2．8 目的片段与克隆载体的连接

2．2．9 用CaCl2法制备大肠杆菌感受态

2．2．10 重组质粒的转化

2．2．11 质粒的提取

2．2．12 重组质粒的酶切鉴定

2．2．13 阳性克隆序列测定

2．2．14 通药敏纸片试验

3 结果与分析

3．1 贺氏菌形态鉴定

3．2 生化试验鉴定结果

3．3 PCR扩增结果

3．4 重组质粒鉴定结果

3．5 16S rDNA测序结果分析

3．6 普通药敏纸片试验结果

4 讨论

5．结论

参考文献

附录

致谢