生姜中抗氧化成分的提取及其抗痴呆效果的研究

摘要

生姜是我国的传统特色资源之一，在国际市场上占有非常重要的地位。我国生姜生产历史悠久，品质优良，但其所含成分的保健功能研究水平较低，多以原料的形式参与国际市场竞争，不利于我国生姜保健价值的开发。因此，开发生姜成分的保健功能对提升我国生姜研究的整体水平具有重要意义。
　　本实验以优质莱芜生姜为原料，采用联合同步提取法提取姜辣素、姜黄素，复合酶法提取生姜中的多糖成分，以 D-半乳糖、三氯化铝构建老年痴呆小鼠模型，喂以生姜中提取的姜辣素、姜黄素、生姜多糖，测得小鼠脑组织中的生化指标，进行差异显著性分析，进而确定生姜中三种提取物抗老年痴呆的效果。主要研究结果如下：
　　（1）生姜多糖的提取与纯化
　　复合酶法提取生姜多糖的工艺条件优化为：α-淀粉酶、纤维素酶、果胶酶及木瓜蛋白酶用量分别为2.5％、1.5%、1%、2%，料液比1:25、pH5.2、温度55℃、时间60min，此工艺条件下多糖提取效果良好，提取率为22.18%。
　　四种生姜多糖脱蛋白方法中，盐酸法、三氯乙酸法的pH分别为3.5、3，Sevage法最佳分离次数为5次时效果最好，蛋白质脱除率分别达到69.14%、60.82%、62.14%。大孔树脂法是四种脱蛋白方法效果最好的，当选取S-8型树脂，静态吸附树脂最佳质量为4g，静态吸附平衡时间为300min。树脂动态吸附实验最佳上样量为50mL，上样流速为1.5mL/min，洗脱流速为2.0mL/min，洗脱剂用量为3倍柱体积时，蛋白质脱除率最高，达到82.45%，多糖损失率仅为10.53%。
　　采用50%、75%、90%终浓度的乙醇-水溶液分级分离得到三个多糖组分GP1、GP2、GP3，得率分别为19.32%、69.72%、10.96%。SePhadex G-100柱层析鉴定GP1是两种多糖成分，GP2为单一的多糖和蛋白质结合的成分，GP3是三种少量的小分子多糖和蛋白质。
　　（2）生姜中三种提取物对痴呆模型小鼠抗痴呆效果的研究
　　生姜中三种成分都有极其显著的抗痴呆效果，与空白模型小鼠相比，高剂量姜黄素可极显著提高其脑组织中SOD、CAT、GSH-Px的活性，降低MDA的含量，分别达到药物模型组的90.81%、92.63%、84.30%、98.15%效果；高剂量姜黄素也可显著提高小鼠肝脏、心脏、肾脏中的SOD、CAT、GSH-Px的活性，降低MDA的含量。高剂量姜辣素可极显著提高其脑组织中CAT、GSH-Px的活性，分别达到药物模型组的86.92%、91.64%，并极显著提高了其67.07%的体重。高剂量多糖可极显著提高痴呆模型小鼠脑组织中CAT的活性，降低MDA的含量，分别达到药物模型组的91.53%、97.02%。三种提取物中抗痴呆效果最好的为高剂量姜黄素组。

目录

声明

符号说明

1 前 言

1.1 老年性痴呆

1.1.1 老年性痴呆发病机制

1.1.2 “氧化应激”抗老年痴呆的研究进展

1.1.3 老年性痴呆的预防保健研究

1.1.4 植物提取成分防治老年痴呆的研究进展

1.2 生姜成分

1.2.1生姜功能

1.2.2生姜中的抗氧化功能成分

1.3 研究的目的意义

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 主要仪器设备

2.3 主要试验试剂

2.4 测定方法

2.4.1 姜辣素的测定

2.4.2 姜黄素的测定

2.4.3 多糖的测定

2.4.4 蛋白质含量的测定

2.4.5 糖醛酸含量的测定

2.5 三种生姜成分的提取

2.5.1 联合同步法提取莱芜生姜中的姜辣素和姜黄素

2.5.2 生姜多糖的提取与纯化

2.5.3 生姜多糖脱除蛋白质方法的确定

2.5.4 生姜多糖乙醇梯度分级

2.5.5生姜多糖GP1、GP2、 GP3的洗脱曲线

2.5.6 多糖组分中性糖、糖醛酸及蛋白质含量的测定

2.6.1 实验动物

2.6.3 给药

2.6.4 小鼠体重的测定

2.6.5 器官组织匀浆的制备

2.6.6 组织蛋白质含量的测定

2.6.7 超氧化物歧化酶（SOD）活性测定

2.6.8 丙二醛（MDA）含量测定

2.6.9 过氧化氢酶（CAT）活性测定

2.6.10谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力测试

2.7 数据处理

3 结果与分析

3.1 生姜多糖的提纯

3.1.1酶法提取生姜多糖条件的确定

3.1.2 生姜多糖脱除蛋白质方法的确定

3.1.3生姜多糖的分级分离

3.2生姜中三种提取物对痴呆模型小鼠抗痴呆效果的研究

3.2.1 生姜提取物对小鼠各组织总SOD活性的影响

3.2.2 生姜提取物对小鼠各组织MDA含量的影响

3.2.3 生姜提取物对小鼠各组织CAT活性的影响

3.2.4 生姜提取物对小鼠各组织GSH-Px活性的影响

3.2.5 生姜提取物对小鼠体重的影响

4讨论

4.1本实验提取生姜多糖的方法与其他方法的比较

4.2 生姜提取物与其他植物提取物抗痴呆效果的比较

5 结论

参考文献

致谢