早期嗅觉剥夺对SD大鼠海马突触外GABAA受体及行为学影响的研究

摘要

目的：探讨早期嗅觉剥夺对SD大鼠海马突触外γ-氨基丁酸 A(GABAA)受体表达及行为学的影响。
　　方法：将3日龄与8日龄SD大鼠的乳鼠各36只分别随机分为空白对照组、实验组、假手术组，每组再分为2个亚组共6组实验鼠。其中通过三氯甲烷滴注法分别对3天实验组和8天实验组乳鼠的嗅粘膜进行破坏；3天和8天假手术组则是用生理盐水替代；空白对照组不给予任何处理。各组在3周龄时进行水迷宫的行为学实验，4周龄时断头取脑组织进行尼氏染色观察；使用免疫组织化学以及实时荧光定量核酸扩增（q-PCR）对海马中突触外GABAA受体δ亚基与α5亚基相关蛋白及mRNA的表达进行相对定量与定量分析。
　　结果：1、行为学改变：（1）逃避潜伏期：结果显示3天实验组逃避潜伏期在实验第二日，第三日和第四日较3天假手术组与空白对照组均有明显的升高，结果具有统计学意义（P<0.01）；3天假手术组与空白对照组间无统计学差异（P>0.05）；而8天实验组逃避潜伏期在4日实验中与8天假手术组和空白对照组两两比较均无统计学差异（P>0.05）。（2）目标象限所处时间：结果显示3天实验组目标象限所处时间较3天假手术组与空白对照组均有明显降低，结果具有统计学意义（P<0.01）；3天假手术组与空白对照组间无统计学差异（P>0.05）；而8天实验组、8天假手术组和空白对照组间两两比较，结果均无统计学差异（P>0.05）。2、形态学改变：（1）尼氏染色：3天实验组海马齿状回神经元细胞排列不规整，细胞间距离增大，尼氏体减少，齿状回颗粒细胞排列松散紊乱。3天组内比较与8天组内比较，海马齿状回与C A3区神经元数目均无统计学差异（P>0.05）。（2）免疫组化：3天实验组中海马齿状回突触外GABAA受体δ亚基与C A3区的α5亚基相关蛋白表达均下降，与3天假手术组和空白对照组的比较中均具有统计学差异（P<0.01）；8天实验组、8天假手术组和空白对照组之间进行两两比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；3、分子生物学改变：实时荧光定量核酸扩增（q-PCR）结果显示，3天实验组海马脑区中的突触外GABAA受体δ亚基与α5亚基mRNA表达均下降，与3天假手术组和空白对照组比较均具有统计学差异（P<0.01）；8天实验组、8天假手术组和空白对照组之间进行两两比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。
　　结论：1、早期嗅觉剥夺组大鼠海马齿状回神经元较其他各组排列不整齐，细胞间距离增大，尼氏体减少，齿状回颗粒细胞排列松散紊乱；2、突触外GABAA受体δ亚基与α5亚基mRNA以及蛋白表达显著减少；3、行为学上则表现为学习记忆功能的减退。实验表明早期嗅觉剥夺可使海马内神经元发育异常，降低其所含δ亚基与α5亚基的突触外GABAA受体的表达量，而且可导致学习记忆功能的下降。

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前言

材料与方法

1 材料

2 方法

3 统计学处理

结果

1 一般情况

2 MORRIS水迷宫结果

3 尼氏染色结果

4 免疫组织化学法检测结果

5 荧光定量PCR

讨论

1 嗅觉的功能与学习记忆之间的联系

2 海马中含δ亚基与α5亚基的GABAA受体的表达与分布

3 海马中GABAA受体的降低与大鼠行为学的关系

4 对GABAA受体作用研究的展望

结论

附图

参考文献

文献综述

综述参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术论文