J亚群禽白血病病毒NX0101株gp85基因在同一个体不同脏器中准种多样性分析

摘要

禽白血病是引起禽类产生肿瘤的主要疫病之一，其病原是反转录病毒科α反转录病毒属的禽白血病病毒(Avain leukosis virus,ALV)。根据病毒囊膜糖蛋白的抗原结构、病毒宿主范围及在细胞培养上不同毒株之间的相互干扰作用，将ALV分为A～J10个亚群,其中A、B、C、D、E和J6个亚群存在于鸡群中。A、B和J亚群为鸡群中引发肿瘤的主要外源性ALV，而在鸡群中较少见由C、D亚群外源性ALV引发的肿瘤，E亚群病毒为内源性白血病病毒，对鸡的致病性很低或无致病。打Roloff1868年第一次报到出淋巴白血病至今，禽白血病已经遍布于世界各个地方，甚至被认为此病几乎涉及所有商品代鸡群，成为严重危害禽类养殖业的最厉害的禽病之一。因为该病呈渐进性发生和持续的低死亡率，所以在相当长的一段时间都没能够引起研究人员的足够重视。直到1997-1998年，J亚群禽白血病在世界范围内爆发，给禽类养殖业也造成了非常大的经济损失，禽白血病才开始引起了相关业界的重视。然而因为该病是以垂直传播为主，使它难以控制，使得鸡群在产蛋、增重两个方面受到严重影响。特别是生病鸡抵抗力降低，容易感染多种鸡病，给鸡群的饲养管理带来巨大的困难。
　　为研究J亚群禽白血病病毒NX0101株gp85基因在白羽肉鸡不同脏器、不同肿瘤组织的变异。选取一例全身弥漫性肿瘤尤其是肝脏、肾脏、肺部肿瘤病例的白羽肉鸡，取其左侧肾脏长出的大块肿瘤、肝脏、右侧肾脏、肺浸出液和攻毒毒株接种DF1，进行IFA检测，对各脏器组织和带毒细胞分别提取DNA，PCR扩增、每个脏器挑取10个阳性克隆进行测序，比较其与原始毒株NX0101 gp85的同源性及分析gp85在同一机体不同脏器的变异规律。左侧肾脏的大块肿瘤、肝脏、右侧肾脏、肺中病毒的gp85与原始毒株NX0101 gp85基因平均同源性为95.6%、94.9%、95.7%、94.4%。攻毒毒株、左侧肾脏的大块肿瘤、右侧肾脏和肺自身10个克隆间的平均同源性分别为99.5%、99.3%、98.7%、99.2%和98.9%。左侧肾脏的大块肿瘤克隆与肝脏、右侧肾脏、肺克隆间的平均同源性分别为96.1%、98.1%、96%，肝脏克隆与右侧肾脏、肺克隆的平均同源性分别为96.3%、96.5%，右侧肾脏克隆与肺克隆的平均同源性为95.8%。攻毒毒株10个克隆与原始毒株相比共有8个稳定的突变位点,在整个gp85和110～120aa,141～151aa和189～194aa三个高变区的NS/S值均在2.5以下，为随机突变。而各脏器克隆有31个稳定的突变位点，而且大部分稳定突变位点在三个高变区之内，各脏器克隆在整个gp85的NS/S 值在2.83～7.29之间，在三个高变区的NS/S值更是高至10以上。NX0101在机体内各脏器感染复制后gp85发生很大的变异，但不同的脏器其变异程度不同，即使在同一脏器不同的阳性克隆间的gp85基因也有一定差异。脏器间病毒gp85基因的差异性要比同一脏器克隆间的大很多。禽白血病病毒感染不仅在群体中表现出多样性，在个体感染不同脏器间也存在明显的多样性。

目录

声明

符号说明

1引言

1.1有关禽白血病

1.2流行病学

1.3病原学

1.4发病机理

1.5病理变化

1.6临床症状

1.7相关诊断

1.8预防治疗措施

2 材料和方法

2.1 材料

2.2 实验方法

3结果

3.1 选取病例的临床表现和剖检变化

3.2 各脏器病料病毒分离结果

3.3各脏器病料分离株及攻毒毒株与原始毒株NX0101的gp85基因同源性比较

3.4原始毒株NX0101 gp85基因在DF1细胞系连续传代（5代）过程中和在同一个体不同脏器感染过程中的变异

4讨论

5结论

参考文献

致谢