松花粉多糖对H9N2亚型AIV的抑制作用及对新城疫-禽流感二联灭活苗的免疫增强作用

摘要

禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）的传播遍及世界各地，可感染多种禽类如鸡、鸭、火鸡等；新城疫病毒(Newcastal diseasevirus，NDV)感染可造成一种急性高度接触性传染病，其中以鸡的易感性最强。禽流感与新城疫混合感染发病率高，且无特效治疗药物。目前在执行生物安全措施的基础上主要采用接种疫苗防控禽流感和新城疫的流行与传播，但疫苗的免疫效果、质量、免疫保护期等的不足，往往造成免疫接种的失败；同时由于地区环境、气候条件等多方面原因导致病毒变异，毒力增强，使疾病的防疫面临极大挑战。当前重要任务是疫苗的免疫效果及其安全性的研究，而寻找安全有效的免疫增强剂提高疫苗免疫效果是当前研究的热点及重点。 植物多糖是一种良好的生物反应调节剂，其具有提高机体免疫力、副作用小、安全无毒等优点，有望研究开发成为新型疫苗佐剂或免疫增强剂。本研究室试验表明松花粉多糖具有提高机体免疫力、增强疫苗免疫效果的作用并且松花粉多糖具有无副作用，天然绿色等特点。基于松花粉多糖的抗病毒及其免疫调节特性，本试验设计3种不同剂量的松花粉多糖配合新城疫-禽流感二联灭活苗免疫14日龄雏鸡，评估松花粉多糖对该疫苗的免疫增强作用，初步探索其增强疫苗免疫的作用机理，为生产推广应用及研发新型生物反应调节剂打下坚实的基础。 本研究共分以下两部分内容： 第一部分 松花粉多糖对H9N2亚型禽流感病毒的抑制作用 根据文献资料报道，松花粉多糖抗病毒的最佳时期为吸附期，其预防作用更显著。为了研究松花粉多糖（TPPPS）的抗病毒特性及最佳时期。本试验以H9N2亚型禽流感病毒为例，通过体外细胞感染及免疫荧光试验验证TPPPS抑制病毒的作用时期，结果表明，TPPPS可以对H9N2亚型禽流感病毒的体外生长起到明显的抑制作用，并且在吸附期对病毒的抑制效果最佳。为比较TPPPS的预防作用及治疗作用，通过体内攻毒保护性试验检测TPPPS攻毒前使用及攻毒后使用的动物血清抗体水平，结果表明TPPPS攻毒前使用组的AI-HI抗体滴度水平优于攻毒后使用组，证明松花粉多糖在预防期使用效果最佳。该部分的体内体外试验结果说明松花粉多糖作为免疫增强剂早期使用更有助于机体免疫功能的提高。 第二部分 松花粉多糖对新城疫-禽流感二联灭活苗的免疫增强作用 为探讨松花粉多糖（TPPPS）对雏鸡接种新城疫-禽流感二联灭活苗的免疫增强作用。本试验将1日龄健康雏鸡360只随机分为6组，每组60只，分别于1日龄口服不同剂量的松花粉多糖及生理盐水，连续口服10 d，于14日龄时免疫新城疫-禽流感二联灭活苗。分别测定各组试验鸡的免疫指标，探讨松花粉多糖对灭活疫苗的免疫增强效果。试验结果表明，各组松花粉多糖的ND、HI抗体效价、外周血IL-2、IL-4、IFN-γ的水平、CD4+/CD8+比值及外周血淋巴细胞转化率都显著高于对照组（P＜0.05），且TPPPS高剂量组（40 mg/mL）免疫增强效果优于低剂量组（10 mg/mL）。本试验表明松花粉多糖对新城疫-禽流感二联灭活苗的免疫效果有明显的增强作用，且以40 mg/mL组效果最佳。

目录

声明

符号说明

1前言

1.1禽流感研究进展

1.1.1禽流感的危害及流行状况

1.1.2禽流感疫苗的现状及特点

1.2新城疫研究进展

1.2.1新城疫的危害及流行状况

1.2.2新城疫疫苗的现状及特点

1.3疫苗佐剂的研究进展

1.4多糖的研究概况

1.4.1多糖的生物活性

1.4.2多糖佐剂

1.4.3松花粉多糖佐剂

1.5本研究的目的与意义

2 材料与方法

2.1材料

2.1.2试验动物

2.1.3主要化学试剂

2.1.4主要试剂的配制

2.1.5主要仪器

2.2方法

2.2.1松花粉多糖的提取及含量测定

2.2.2松花粉多糖液的制备

2.2.3松花粉多糖抑制H9N2流感病毒试验

2.2.4松花粉多糖对新城疫-禽流感二联灭活苗的免疫增强作用

2.3数据分析

3结果与分析

3.1松花粉多糖抑制H9N2流感病毒试验

3.1.1体内试验

3.1.2体外试验

3.2松花粉多糖对新城疫-禽流感二联灭活苗的免疫增强作用

3.2.1不同浓度的松花粉多糖对ND抗体效价的影响

3.2.2不同浓度的松花粉多糖对AI抗体效价的影响

3.2.3不同浓度的松花粉多糖对血清IL-2、IL-4、IFN-γ分泌量的影响

3.2.4不同浓度的松花粉多糖对外周血CD4+/CD8+T比值的影响

3.2.5不同浓度的松花粉多糖对鸡外周血淋巴细胞转化率的影响

3.2.6不同浓度的松花粉多糖对NDV/H9N2攻毒保护的效果

4讨论

5结论

参考文献

致谢

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