逍遥散对慢性应激大鼠海马神经原代细胞L-型-钙离子通道快速作用机制的影响

摘要

研究目的：
　　总结研究逍遥散治疗郁病相关疾病的机制，在逍遥散抗慢性应激损伤的基础上展开相关实验，来明确慢性应激损伤的机制或探求慢性应激损伤可能存在的一些中枢机制。
　　研究方法：
　　SPF级 Wistar雄性大鼠27只，体重180g-230g，随机分为空白对照组、慢性应激模型组、逍遥散治疗组3组，每组9只大鼠，参考 Cart的（多相性）应激模型方法，用五种应激源给与刺激，刺激方法包括：足底电击、冰水游泳、禁水、禁食和束缚。为避免大鼠适应，相邻两天不能出现重复，使其无规律性，并且每天刺激安排不定时随机，连续刺激21天。于最后给药刺激2h左右后股动脉取血，血液离心、分离血清、灭活并标记。无菌条件0.22um抽滤除菌后lml分装保存。
　　取 Wistar乳鼠海马神经元代细胞，实验分为空白对照组、正常模型血清组、慢性应激模型血清组、逍遥散治疗模型血清组、慢性应激模型组血清+MK-801组、逍遥散治疗模型血清+MK-801组、慢性应激模型组血清+Nifedipine组、逍遥散治疗模型组血清+Nifedipine组、慢性应激模型组血清+MK-801+Nifedipine组、逍遥散治疗模型组血清+MK-801+Nifedipine组十个组。空白对照组细胞指标变化，非单一因素的，先加入工具药，再加入相应的干预血清，研究其对 Wistar乳鼠影响海马细胞的表达，并致力于发掘祖国传统中药逍遥散对慢性应激损伤和机制可能存在的作用。
　　以免疫荧光方法检测细胞纯度；用MTT方法检测元代细胞存活率；用激光共聚焦显微镜技术检测游离钙离子浓度。
　　研究结果：
　　1、培养7天，乳鼠神经元代细胞结构完整，胞体清晰，纯度最高可达83.71％，平均为76.32%。
　　2、各组神经元代细胞内钙离子变化有明显差异。第（1）组空白对照组细胞内钙离子表达为标准，第（2）组（正常模型血清组）组与第（1）组（空白模型血清对照组）细胞内钙离子表达无统计学差异，其他各组均有统计学差异；第（3）组（正常模型血清组）钙离子表达下调不明显；第（4）组（慢性应激模型血清组）细胞内钙离子表达明显上调；第（5）组（逍遥散治疗模型血清组）细胞内钙离子内流升高，但明显低于第（4）组；其他各组钙离子内流表达低于第（1）组，第(9)组(慢性应激模型组血清+MK-801+Nifedipine组)与第(10)组(逍遥散治疗模型组血清+MK-801+Nifedipine)细胞内钙离子表达明显下调。
　　研究结论：
　　中药逍遥散抗慢性应激损伤可能从多种信号途径起作用，如海马神经原代细胞维持稳定状态、抗兴奋性毒性、使长期慢性应激导致过度应激。而中药逍遥散具有能抗慢性应激损伤的作用。

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引言

第一节 逍遥散含药血清的制备

第二节 乳鼠海马神经原代细胞体外培养及鉴定

第三节 海马神经原代细胞存活率研究

第四节 观察逍遥散对慢性应激状态下大鼠海马神经元代细胞的钙离子通道的影响

讨论

结论

附图

参考文献

综述一: 逍遥散抗慢性应激损伤的研究进展

综述二: 钙离子对慢性应激损伤的研究

致谢

攻读硕士学位期间的学术论文

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