牛磺熊去氧胆酸对大鼠急性脊髓损伤神经细胞自噬的影响及对其保护作用

摘要

目的：探讨牛磺熊去氧胆酸对改良 Allen’s重物打击法构建大鼠急性脊髓损伤模型神经细胞自噬的影响。
　　方法：选取6-8周雄性 SD大鼠，体重250-300g共计72只。随机分为三组：假手术组、手术组对照组（生理盐水组）、牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)组（分高低剂量两个亚组）。分别于脊髓损伤后24小时、5天、10天处死实验动物。参照 Basso Beattie Bresnahan(BBB)运动功能评分,对各组大鼠损伤后和猝死前作后肢运动功能评分，比较对照组与TUDCA组大鼠在运动功能方面的差异性；采用电子显微镜，观察神经细胞中自噬现象的发生发展及TUDCA干预后受损脊髓神经细胞的生物学特性；HE染色对比脊髓组织形态在光镜下的差异；采用 Western blotting方法，检测自噬相关因子（Beclin-1）在各组的表达情况；检测凋亡相关因子caspass-3在各组的表达情况；并采用 RT-PCR方法分别检测上述蛋白的mRNA表达。
　　结果： BBB运动功能评分中假手术组大鼠的活动不受限。对照组与实验组比较，对照组的BBB评分值明显低于实验组，反映到大鼠的活动上则可见活动性略差于实验组。实验组中高低药物剂量对大鼠活动的影响无明显差异，即生理盐水组的运动功能评分明显减弱。
　　采用电子显微镜，观察神经细胞中自噬现象的发生发展及TUDCA干预后受损脊髓神经细胞的生物学特性；HE染色对比脊髓组织形态在光镜下的差异。正常脊髓形态组织，脊髓神经元及胶质细胞完整，未见明显坏死细胞。对照组损伤处的脊髓组织，可以见到细胞呈空泡状变性，其间大片的出血、水肿,细胞组织结构疏松明显，灰质组织被破坏，伴有大量神经元细胞坏死,而存活的神经元细胞中，部分可见核固缩损伤处的脊髓组织。TUDCA处理的实验组组，与对照组相比标本上同样以出血、水肿和坏死为主要表现，但对照组最大的特点表现在，损伤中心附近的节段，同样出现损伤,可以看到损伤范围扩大，与其相邻的神经细胞破坏明显,部分细胞形态有了较明显的改变，实验组中，虽然细胞损伤的范围较之前同样有所扩大，但是和对照组相比，波及的范围明显较小，并且相邻神经细胞的破坏程度较轻。
　　采用 Western blotting方法，检测自噬相关因子（Beclin-1）在各组的表达情况。实验组Beclin-1的表达均高于对照组，并且有统计学差异，同样TUDCA的给药剂量的高低之间比较无明显统计学差异。
　　采用 Western blotting方法，检测凋亡相关因子（caspass-3）在各组的表达情况。SCI早期对照组大鼠各时间点 caspase-3的表达均较假手术组明显增高，而实验组在给予TUDCA干预后caspase-3的表达均低于对照组，并且有统计学差异。而实验组中TUDCA给药高低剂量的比较中无明显统计学差异。
　　结论： TUDCA的干预可显著激活大鼠急性脊髓损伤神经细胞自噬的表达，抑制神经细胞的凋亡对神经元细胞有保护作用。

目录

声明

符 号 说 明

前言

1.1 材料与方法

1.2.1脊髓损伤大鼠模型的制备

1.2.2 损伤脊髓的提取及实验分组

1.2.3 染色石蜡组织切片的HE染色

1.2.4 RT-PCR检测

1.2.5 Western blot检测

1.2.4 透射电镜观察

2.1统计学处理

3.1结果

3.1.1运用Basso BeattieBresnahan( BBB )方法及量表进行运动功能评分

3.1.2电镜观察

3.1.3染色。

3.1.4 RT-PCR分析

4.1讨论

结论

参考文献

综述:

致谢

攻读学位期间发表的学术论文