PKC信号转导通路及Cx43在舒芬太尼预处理乳鼠心肌细胞缺氧/复氧中的作用

摘要

目的：探讨PKC信号转导通路及Cx43在舒芬太尼预处理乳鼠心肌细胞缺氧/复氧中的作用。
　　方法：原代心肌细胞分离培养。将5d的心肌细胞分成八组：正常对照组(C组)：细胞培养过程中不给予任何处理；缺氧/复氧损伤组(I/R组)：缺氧2h，复氧1h；吗啡预处理组(MF组)：吗啡孵育15min后,除去药物培养20min，其他同I/R组；舒芬太尼预处理组(SF组)：舒芬太尼孵育15min后，除去药物培养20min，其他同I/R组；PKC激动剂PMA+吗啡预处理组(PMA+MF组)：PMA孵育10min，再进行吗啡预处理,其他同I/R组；PKC抑制剂Rottlerin+吗啡预处理组(ROT+MF组)：Rottlerin孵育10min，再进行吗啡预处理，其他同I/R组；PKC激动剂PMA+舒芬太尼预处理组(PMA+SF组)：PMA孵育10min，再进行舒芬太尼预处理，其他同I/R组；PKC抑制剂Rottlerin+舒芬太尼预处理组(ROT+SF组)：Rottlerin孵育10min，再进行舒芬太尼预处理，其他同I/R组。各组做上述相应处理后取材检测细胞存活率、免疫荧光共聚焦技术检测缝隙连接蛋白Connexin43(Cx43)的平均光密度(AOD)、用Western-blot检测细胞Cx43总蛋白及其磷酸化水平(P-Cx43)的表达量。
　　结果：与C组比较，其余各组心肌细胞存活率、Cx43AOD值心肌细胞Cx43总蛋白表达及P-Cx43表达降低(P<0.05)；与I/R组比较，MF组、SF组、ROT+MF组、ROT+SF组、PMA+MF组、PMA+SF组心肌细胞存活率、Cx43AOD值、Cx43总蛋白和P-Cx43表达增高(P<0.05)；与MF组比较，ROT+MF组心肌细胞存活率、Cx43AOD值、Cx43总蛋白及P-Cx43表达降低(P<0.05)，SF组心肌细胞存活率、Cx43AOD值和Cx43总蛋白降低(P<0.05)，而P-Cx43表达增高(P<0.05)，PMA+MF组心肌细胞存活率、Cx43AOD值、Cx43总蛋白和P-Cx43表达均增高(P<0.05)；ROT+SF组较SF组心肌细胞Cx43AOD值、Cx43总蛋白和P-Cx43表达低(P<0.05),而PMA+SF组较SF组心肌细胞存活率、心肌细胞Cx43AOD值、Cx43总蛋白和P-Cx43表达高(P<0.05)。
　　结论：吗啡和舒芬太尼预处理可减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤，舒芬太尼对心肌细胞的保护作用较吗啡弱。这种心肌细胞保护作用可能与PKC信号通路的激活有关，并且通过PKC信号通路调节Cx43及其磷酸化表达。

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前言

实验材料与方法

1.实验材料

1.1 原代细胞

1.2 实验试剂与药物

1.3 常规实验耗材

1.4 实验试剂配制

1.5 实验仪器和设备

2.实验方法：

2.1培养原代心肌细胞

2.2 原代心肌细胞缺氧/复氧损伤模型的建立

2.3 实验分组

2.4 原代心室肌细胞生长状态

2.5 细胞成活率的检测：

2.6免疫荧光共聚焦技术检测缝隙连接蛋白 Cx43的平均光密度(AOD)

2.7 Western Blot 检测 Cx43总蛋白及其磷酸化表达水平

2.8 统计方法

结果

1.原代心肌细胞培养

1.1心肌细胞形态学观察

1.2心肌细胞的搏动频率分析

2.心肌细胞的存活率

3.免疫荧光共聚焦技术检测缝隙连接蛋白 Cx43的平均光密度(AOD)

4． Western blot 法检测心肌细胞 Cx43总蛋白及其磷酸化水平的表达

讨论

结论

参考文献

综述:PKC及Cx43改变与心肌缺氧/复氧损伤关系的研究进展

致谢

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