普罗布考预防经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄的基础与临床研究

摘要

该文由现篇论文组成.一、普罗布考抑制bFGF/H<,2>O<,2>诱导大鼠主动脉平滑肌细胞增殖与调亡的实验研究.目的:血管平滑肌细胞(VSMC)增殖与凋亡是动态粥样硬化、血管成行术后再狭窄和高血压等血管病变的重要病理成分.该研究以bFGF/H<,2>O<,2>作为VSMC增殖与凋亡的诱导因子.观察普罗布考对VSMC增殖与凋亡的影响,并探讨其机制.结率:1、普罗布考能显著抑制bFGF或H<,2>O<,2>刺激的VSMC增殖和DNA合成,但对bFGF或H<,2>O<,2>预刺激诱导的细胞增殖无抑制作用.2、普罗布考对细胞增殖周期有强大的抑制作用.能显著抑制VSMC由静止期向合成期期转变,使VSMC停滞在G<,0>/G<,1>期.3、适宜剂量H<,2>O<,2>刺激VSMC增殖,大剂量H<,2>O<,2>诱导VSMC凋亡.普罗布考对增殖的VSMC有致凋亡作用,而对凋亡的VSMC有保护作用.4、普罗布考可以抑制VSMC由收缩表型向合成表型转变.二、ERK1/PTPasemRNA转录表达与血管平滑肌细胞内氧化不原调节机制相关性的实验研究.目的:血管平滑肌细胞(VSMC)是动脉粥样硬化和再狭窄病变的主要病理部成分.该实验以GSH和GSSG含量作为细胞内氧化还原状态的指标,采用生长因子bFGF、活性氧H<,2>O<,2>和抗氧化剂普罗布考、N-己酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)研究细胞内氧化还原状态变化与ERK1/PTPaselmRNA转录表达的关系,探讨抗氧化剂抑制VSMC增殖的氧化还原和分子机制.结论:1、H<,2>O<,2>和bFGF均可使VSMC内氧化还原平衡状态失衡,呈时间依赖性和浓度依赖性.2、抗氧化剂普罗布考100umol/L和NAC10mmol/L可以改善细胞内氧化状态,使氧化还原状态趋于正常.3、H<,2>O<,2>100umol/L和bFGF100u/ml可诱导ERK1mRNA相对表达量显著增加,而PTPasel明显下生.抗氧化剂普罗布考和NAC可以明显下调由活性氧/生长因子诱导的ERK1mRNA高表达,上调由活性氧/生长因子诱导的PTPase1低表达.

目录

符号说明

论文一普罗布考抑制bFGF/H2O2促大鼠主动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的实验研究

前言

实验材料

一药品和试剂

二基本仪器设备

实验方法

一大鼠主动脉平滑肌细胞的培养

1大鼠主动脉平滑肌细胞的原代培养

2传代培养

二实验分组

三试剂的配制与使用方法

四DMEM培养液的配制

五四唑盐比色测定

六细胞DNA合成测定

七台盼蓝细胞计数

八透射电镜观察

九免疫细胞化学染色

十流式细胞术分析细胞周期

十一统计学处理

结果

一VSMC鉴定

二不同浓度H2O2对VSMC生存的影响

三不同浓度bFGF对VSMC生存状态的影响

四不周浓度普罗布考对bFGF/H2O2促VSMC增殖作用的影响

五普罗布考对H 2O2刺激VSMC增殖的影响

六普罗布考对bFGF促VSMC增殖的影响

七普罗布考对VSMC增殖周期和凋亡的影响

八bFGF/H2O2对VSMC表型的影响

附图

讨论

一普罗布考对VSMC增殖与凋亡的影响

二普罗布考对VSMC增殖周期的影响

三普罗布考对VSMC表型的影响

结论

创新性与限制性

参考文献

符号说明

论文二ERK1/PTPa se1mRNA转录表达与血管平滑肌细胞内氧化还原调节机制相关性的实验研究

前言

实验材料

一药品与试剂

二基本仪器

实验方法

1终止液的配制方法

2 VSMC培养

3实验分组

4细胞内GSH和GSSG的测定方法

5 VSMC RNA的提取

6 RNA逆转录

7 PCR扩增

8 PCR产物的鉴定与定量分析

9统计学处理

实验结果

1不同浓度H2O2对细胞内GSH和GSSG含量的影响

2 H2O2不同刺激时间对细胞内GSH和GSSG含量的影响

3bFGF不同浓度对细胞内GSH和GSSG含量的影响

4bFGF不同时间对细胞内GSH和GSSG含量的影响

5普罗布考对细胞内GSH和GSSG含量的影响

6 NAC对细胞内GSH和GSSG含量的影响

7普罗布考对H2O2刺激的E RK1/PTPase mRNA表达的影响

8普罗布考对bFGF诱导细胞ERK1/PTPase mRNA表达的影响

9 NAC对H2O2诱导的ERK1/PTPase mR N A表达的影响

10 NAC对bFGF诱导的VSMC ERK1/PTPase mRNA表达的影响

附图

讨论

1 VSMC增殖与凋亡的氧化还原机制

2抗氧化剂对细胞内氧化还原状态的影响

3.抗氧化剂对ERK1/PTPase mRNA表达的影响

结论

创新性与限制性

参考文献

符号说明

论文三普罗布考预防经皮腔内冠状动脉成行术后再狭窄的临床研究

资料与方法

1研究对象

2研究方法

3观察指标与检测方法

4疗效评价标准

5统计学方法

结果

1病人一般资料

2冠状动脉造影病变情况

3临床事件与再狭窄

4不良反应

5实验室检查结果

6再狭窄与PTCA前相关因素

附图

讨论

1.普罗布考的抗氧化作用对再狭窄的影响

2.普罗布考调脂作用对再狭窄的影响

3.普罗布考内皮保护功能对再狭窄的影响

4.再狭窄与临床事件的关系

结论

创新性与限制性

参考文献

致谢

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